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        酚红指示法

        相关实验:药物血浆半衰期及表观分布容积的测定实验

        最新修订时间:

        原理

        酚红(PSP)为指示剂,在碱性环境中呈现紫红色。PSP 静脉注射后,在体内不代谢,其消除主要由肾脏近曲小管分泌.因此可通过比色测定不同给药时间血浆中PSP 的光密度值,定量计算血中PSP的浓度。

        材料与仪器

        步骤

        1.  麻醉并固定:取健康家兔一只,称重, 3%戊巴比妥钠1 ml /kg耳缘静脉注射麻醉,仰卧位固定在兔台上。
         
        2.  手术:纵向切开颈部正中皮肤,分离颈下组织,找到气管,在气管一侧分离出颈总动脉,从颈总动脉下穿两线待用。由耳缘静脉注射肝素钠1 ml /kg,结扎远心端,近心端用动脉夹夹住,两端之间留2 cm 距离,用眼科剪在远心端朝近心端方向呈45 度角剪小口,然后朝向心方向插入塑料管,推进1~2 cm结扎并固定,塑料管用止血钳夹住,松开动脉夹。
         
        3.  取空白血:自动脉导管取血约1 ml,置于编号的干燥抗凝试管中,轻摇混匀。
         
        4.  给药及取血样:从耳缘静脉注射6 ml/kg 0.6%酚红溶液,给药后2.  5.  10.  20 和30分钟分别取血约1 ml,置于编号的干燥抗凝试管中,轻摇混匀。
         
        5.  离心和测定:各取定量血样于编号离心试管中,以3000转/分离心10 分钟,分别取血浆0.1 ml,加入清洁编号试管内,加稀释液各2 ml,摇匀后静置5 分钟,以给药前血样做空白对照调零,于分光光度计560 nm波长处进行比色测定,记录其光密度值。将给药后不同时间的光密度输入计算器,计算出不同时间酚红的血浆浓度。
         
        6.  制作酚红溶液1.  2.  4.  8.  16 umol·L-1标准曲线(由老师率先绘制)
         
        实验结果及分析:
         
        以浓度为横坐标,以光密度为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程。
         
        以血浆药物浓度的对数值为纵坐标,时间为横坐标绘制时量曲线,一级消除动力学的时量关系呈直线。
         
        该直线的方程式为logCt=lgCO-k/2.303·t
         
        药物血浆半衰期T1/2=0.693/k(单位:h或min)
         
        Vd=A/C0(A为给药总量)
         
        用FX-3600P计算器,采用直线回归的运算程序,计算出不同时间酚红的血浆浓度。
         
        血样药浓记录表
         

        酚红指示法

        注意事项

        1.  分离颈总动脉时,要把神经分离开,结扎的时候不能结扎神经。
         
        2.  用取液器取上清液的时候,小心谨慎,不要取出血。
         
        3.  离心时应将取血试管平衡后对称置入。
         
        4.  禁止用手接触比色皿的光面,若有液体,只能用擦镜纸。

        来源:丁香实验

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