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        SDS煮沸法

        相关实验:培养细胞标记和裂解物的制备实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.  标记和洗涤细胞(温和去污裂解法,步骤1~7)。
         
        2a.  对于贴壁细胞:加入适量SDS裂解液至培养皿中。(35 mm 培养皿加0.1 ml,50 mm 培养皿0.25 ml,100 ml 培养皿0.5 ml)立即用橡皮细胞刮于刮下细胞并转移至带螺口盖的微量离心管中。

        2b.  对于非贴壁细胞:在旋涡混合器上短暂振荡细胞沉淀使之松散,加入1 ml SDS裂解缓冲液(毎5×107细胞)后,再次振荡。

        3.  煮沸2~5 min,加入4体积的RIPA正液,充分混匀。
         
        4.  于4℃以26 000 g 离心90 min 或在冷冻离心机上以最大速度离心以回收细胞裂解物。
         
        5.  如常进行免疫沉淀分析,并用免疫沉淀洗液进行洗涤。

        来源:丁香实验

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