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        淋巴细胞转化实验

        相关实验:淋巴细胞转化实验

        最新修订时间:

        原理

        正常机体的T淋巴细胞在体外培养过程中受到特异性抗原或有丝分裂原刺激。可转化为淋巴母细胞。细胞免疫缺陷时,患恶性肿瘤或某些其他疾病时。转化率显然降低。基本原理是采用T淋巴细胞敏感 的刺激物在体外刺激T淋巴细胞,T淋巴细胞受到刺激后可发生形态学和生物化学的变化,部分小淋巴细胞转化为不成熟的母细 胞,并进行有丝分裂。用形态学法或放射性 核素法检测T细胞的增值程度,并以此评定相应的细胞功能。

        材料与仪器

        步骤

        1.  采肝素抗凝血1~2毫升(1毫升血中加肝素20单位)充分混匀。37℃静置1~2小时。红细胞沉淀后,吸取血浆层并捎带些红细胞。移入另一无菌试管中。计算白细胞数然后2000 rpm 离心10分钟。弃上清液。用199培养液将沉淀的白细胞配成1x107/毫升细胞悬液。

        2.  取细胞悬液0.6毫升(6x106细胞)加入含有2.4毫升199培养液的培养瓶中。

        3.  按每毫升营养液加30 ug PHA加入PHA。

        4.  37℃孵育68~72小时。培养过程中,每天翻动培养瓶1~2次。

        5.  培养后。振荡培养瓶。将细胞重新悬起,然后移入试管中。

        6.  1000 rpm 离心5分钟。

        7.  尽量弃去上清液,将沉淀物混匀,取一滴放在载玻片上,推成血膜(头、体、尾分明)干燥,用瑞特氏染液染色)镜检。

        8.  计算淋巴细胞的转化率:油镜下观察每张玻片的头、体、尾三段。每段各一纵列(目的是减少推片中细胞分布不均的误差)。
         
        淋巴细胞转化实验
         
        9.  每张玻片记数200~400个细胞,计算转化率其中头部50~100,体部50~100,尾部100~200细胞。 一般认为转化率的正常值为60~70%
         
        淋巴细胞转化实验

        注意事项

        1. 培养基成分对转化率影响较大,注意其有效期限。


        2. 小牛血清用前需要灭活。


        3. 培养时要保证足够的气体,保证无菌。


        4. PHA剂量过大会对细胞有毒性,PHA转化反应剂量一般10ml,培养瓶内液体总量不要超过2ml,太小不足以次级淋巴细胞转化,实验前先测定。

        常见问题

        淋巴细胞的转化标准

        淋巴细胞转化实验

        1. 计算淋巴细胞的转化率:油镜下观察每张玻片的头、体、尾三段。每段各一纵列(目的是减少推片中细胞分布不均的误差)


        公式:淋巴细胞转化率=转化淋巴细胞数/(转化淋巴细胞数+未转化淋巴细胞数)×100%


        2.  每张玻片记数200-400个细胞,计算转化率其中头部50-100,体部50-100,尾部100-200细胞。 一般认为转化率的正常值为60-70% ;


        3. 目前最常用植物血凝素(PHA)作为分裂原来检测受试者的淋巴细胞转化率,从而判定其细胞免疫功能,称为PHA刺激淋巴细胞转化实验。


        来源:丁香实验

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