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        阴离子交换HPLC

        相关实验:离子交换高效液相层析实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  在使用IEX柱前,依次以序列溶液洗柱去除柱上吸附的蛋白质:10倍柱床的已脱气水和10倍柱床的高盐缓冲液,对聚合体IEX柱,洗柱液在8 ~10,对硅胶类柱,洗柱液pH在7~8。

        2.  在室温平衡IEX柱,对4 mm 内径的柱子,以1.0 ml/min 的流速用0.2 mol/l,pH7.5的Tris·Cl缓冲液和Tris/NaCl缓冲液的50%混 合液洗20 min,然后用10倍柱床以上的0.2 mol/l,pH7.5的Tris·Cl缓冲液冲洗柱子,
         
        3.  用210~220 nm 0.1~1.0 AUFS 监测空白的层析过程:0%~75%Tris/NaCl线性梯度20 min 以上,保持在75%缓冲液5 min,在5  min 以上的时间回复到0%。在下次上样前,保持0%缓冲液15 min。
         
        4.  注射10 μl 0.2 mol/l Tris·Cl pH7.5进行一次空白样品的假层析。

        5.  在5 000 g 离心IEX蛋白标准或多肽混合物5 min,用以0.2 mol/l Tris·Cl清洗过的HPLC进样器吸取5 μl 上清,加入样品环中,并注入柱子,按步骤3开始梯度洗脱。
         
        6.  将每个层析峰收集干不同的聚丙烯管子,用反相HPLC脱盐,用Speedvac蒸发器除去溶剂。

        来源:丁香实验

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