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        均一浓度的微型凝胶电泳

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  按顺序安装带凹口的小玻璃平板或小矩形玻璃平板、0.75 mm 垫片、大矩形玻璃平板叠放在一起组装成夹层,并确保夹层放入多胶灌制装置后,垫片能安放妥当,两头均与玻璃平板的上下边缘对齐。
         
        2.  将凝胶夹层紧密地安放在多板灌胶装置中,用丙烯酸隔板或聚碳酸酯薄片填满灌胶室的空位。
         
        3.  安装制胶室的前面板,于硅胶密封衬条处用夹子固牢,检査证实玻璃平板和垫片的排放整齐。
         
        4.  配制分离胶溶液,0.75 mm 厚的凝胶,配30 ml 溶液。在使用前先不加过硫酸铵和TEMED。
         
        5.  用50 ml 注射器将分离胶液体慢慢注入制胶室,至分离胶高6 cm 即可,留1.5  cm 作积层胶。在胶顶面加入100 μl 水饱和异丁醇,让胶聚合约1 h。

        6.  倾去异丁醇,以1×Tris·Cl/SDS,pH8.8缓冲液冲洗凝胶表面。

        7.  在配积层胶溶掖前,试将梳子插入夹层,操作上将梳子靠压在矩形的或高的玻璃平板上,以使梳子的齿都在夹层的开口处对齐,然后将它插入夹层,完成上述操作后,再把梳子拔出。
         
        8.  配积层胶溶液,用10 ml 注射器将积层胶溶液分别加入各夹层,插入梳子,小心不要引入气泡,让凝胶聚合1 h。

        9.  取去前面板,小心将凝胶板从制胶室中取出,用长刀片将各片胶板分开。
         
        10.  拔出梳子,以1×SDS电极缓冲液冲洗样品扎,用记号笔在前面玻璃极上划线以提示出样品孔底部的位置。
         
        11.  往上、下缓冲液贮槽加入1×SDS电极缓冲液,上槽的液体应高出四口平板2~3 cm。

        12.  制备待测蛋白质祥品和蛋自质分子量标准混合物用微量吸管加样,把吸管头穿过上槽缓冲液插入加样孔中,在平板玻璃上的划好的记号提示下, 将样品加入孔中。
         
        13.  0.75 mm 厚的凝胶在10~15 mA 电流下电泳至染料前沿到达凝胶底部。

        14.  拆卸装置并取出凝胶,进行蛋白质检测。

        来源:丁香实验

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