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        凝胶块中DNA连接

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  重复基本方案中的步骤1~5。
         
        2.  在高质量的低融点胶中分离久DNA(0.7%,TAE缓冲液),切下体积尽可能小的所需DNA条带(20~50 μl )至小离心管中。

        3.  在70℃融化低融点胶10 min 以上,每个连接反应在不同的试管中进行。

        4.  在的体积中混合含适当DNA的凝胶块(需要时用水补足)37℃放置数分钟。
         
        5.  加入11 μl 冰冷的含2×缓冲液、ATP和T4 DNA连接酶的混合物,并于15℃温育1 ~48 h。
         
        6.  在73℃重新融化胶5~10 min 取5 μl 连接产物加于200 μl 感受态大肠杆菌,见基本方案中的步骤8。

        7.  重复基本方案中的步骤9。

        来源:丁香实验

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