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        芯片毛细管电泳法

        相关实验:芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂

        最新修订时间:

        原理

        研究用芯片毛细管电泳激光诱导荧光检测系统分离测定经7-chloro-4-nitrobenzo-2-oax-1,3-diazole(NBD-Cl)衍生的麻黄碱和伪麻黄碱的实验条件。采用胶束毛细管电动色谱分离体系(12 mmol/L SDS+10 mmol/L硼砂缓冲液,pH9.0),在45 mm长的通道上实现了麻黄碱和伪麻黄碱的快速分离,一次分离小于1.5min。10~100 mg/L范围内,峰高与浓度呈良好的线性关系,麻黄碱、伪麻黄碱的检出限分别是0.83 mg/L和1.10 mg/L。

        材料与仪器

        步骤

        1. 芯片的制作


        十字通道玻璃芯片制备。分离通道总长45 mm(有效长度38 mm),进样通道总长10 mm,通道顶宽50 μm,深15 μm。

         

        2. 尿样预处理 


        取5 mL尿样于20 mL离心管,加入2 mL乙醚和1 g无水Na2SO4,振荡5 min后离心分离。移取上层有机相于2 mL离心管,用N2吹干,加100 μL水溶解残留物。

         

        3. 待测物的衍生 


        移取EP和PEP混合标准溶液(或上述溶液)100μL于2 mL的离心管,加入100μL 100 mmol/L硼砂缓冲液(pH8.4),25 mmol/L NBD-Cl溶液200 μL,用水稀释至1 mL后,50℃水浴中温浴30 min。

         

        4.分离测定 


        十字通道依次用0.1 mol/L NaOH、水、运行缓冲溶液各冲洗20、10、20 min。在芯片的试样废液池、缓冲液池、缓冲液废液池中加入运行缓冲液,并使通道内充满运行缓冲液;在试样液池中加入试样溶液,使激光束聚焦于芯片分离通道下游离十字交叉口38 mm处。按下列程序分别向4个储液池施加电压,进行进样和分离操作:进样30 s,试样液池、试样废液池、缓冲液池、缓冲液分别施加1000、0、830、1000 V;分离120 s,试样液池、试样废液池、缓冲液池分别施加2170、2170、2600和0 V电压。

        注意事项

        1. 注意夹流电压的选择。


        2. 不同SDS浓度对分离影响不同。


        3. 选择合适的pH、分离电压。

        常见问题

        来源《芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂》

        来源:丁香实验

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