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        高效液相色谱-串联质谱法

        相关实验:高效液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中糖皮质激素类药物多残留

        最新修订时间:

        原理

        糖皮质激素是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素,具有调节糖、脂肪和蛋白质的生物合成和代谢的作用,还具有抗炎作用,称其为“糖皮质激素”是因为其调节糖类代谢的活性最早为人们所认识。糖皮质激素的基本结构特征包括肾上腺皮质激素所具有的C3的羰基、Δ4和17 β酮醇侧链以及糖皮质激素独有的17 α-OH和11 β-OH。

        材料与仪器

        步骤

        一、样品制备


        1.提取


        在室温下,称取(2 ± 0.05)g组织样品于50 mL离心管内,加乙酸乙酯15 mL,涡旋混匀提取3 min,离心10 min(4000 rpm),移取乙酸乙酯层至50 ml梨形瓶中。残渣中加0.1 mol/L NaOH溶液10 mL,混匀,加乙酸乙酯15 mL提取后移取乙酸乙酯层。合并两次提取液,40 ℃下减压浓缩近干,加入乙酸乙酯1.0 mL和正己烷5 mL,使之充分溶解,待净化。


        2.净化


        用Silica固相萃取柱进行SPE净化。用正己烷5 mL活化固相萃取柱后,上样,先用正己烷 5 mL淋洗,抽干,然后用正己烷——丙酮(6∶4,v/v)5 mL洗脱。洗脱液在40 ℃下 N2吹干,以20%乙腈水溶液1.0 mL溶解残渣,过0.45 μm滤膜,供LC/MS/MS法测定液相色谱及质谱条件


        二、色谱条件


        1.色谱柱:Thermo Hypersil Gold (150 × 2.1 mm,5 μm);梯度洗脱见表1,其中A:水(含0.01 %甲酸);B:乙腈;流速:250 μL/min;进样量:10 μL。


        2.质谱条件


        电喷雾电离源(ESI),负离子模式;选择反应监控(SRM)扫描模式,喷雾电压:3500 V;离子传输管温度:350 ℃;氮气作为鞘气和辅助气,其中鞘气为40 arb, 辅助气为5 arb,氩气用作碰撞气, 碰撞压力为1.5 mTorr; 选择反应监测(SRM)。

        常见问题

        本方法糖皮质激素类药物在猪、牛、羊的肝脏和肌肉,鸡肉,鸡蛋,牛奶中的提取回收率均可达60 - 110 %,满足国内外的最低检出限要求,并且定量定性准确,重现性好。 

        来源:丁香实验

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