• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        TE-饱和酚/氯仿提取法

        相关实验:病毒 RNA 提取实验

        最新修订时间:

        原理

        大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。

        材料与仪器

        步骤

        一、实验材料准备

        1.  材料
         
        提纯TMV病毒液(10 mg/ml)。
         
        2.  设备
         
        冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。
         
        3.  试剂
         
        TE-饱和酚:氯仿(1:1),氯仿,3 M NaAc(pH5.2),乙醇(100%和70%),TE缓冲液,无RNA 酶的双菌水。
         
        二、操作步骤
         
        1.  取一eppendorf管加入提纯TMV(10 mg/ml)400 ml,再加入等体积酚/氯仿,盖紧管盖后用手充分振荡1分钟,4℃下12 000 g离心10分钟。
         
        2.  吸取水相于一新eppendorf管,再用酚/氯仿抽提,直至水相和有机相交界面无蛋白为止。
         
        3.  吸取水相于新eppendorf心管,加入等体积氯仿,用手倒置离心管数十秒,4℃下12 000 g离心10分钟。
         
        4.  取水相,加入1/10倍体积的3 mol/L NaAc(pH5.2),2.5倍体积的冰冷乙醇,混匀,-20℃30分钟。
         
        5.  4℃下12 000 g离心15分钟,小心弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀,4℃下12 000 g离心5分钟。
         
        6.  小心弃去上清液,沉淀真空干燥5分钟或空气干燥10分钟,并溶于无RNA 酶的双菌水或TE缓冲液中。
         
        7.  取10 ml进行电泳分析。
         

        注意事项

        1.  整个操作应尽可能在低温下进行。
         
        2.  由于病毒RNA 镶嵌于外壳蛋白里面,因此要充分剥去病毒外壳蛋白,一般需要多次进行酚/氯仿的抽提。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序