致突变 PCR，是基于 PCR 技术在 DNA 序列中引入碱基突变或序列的插入和缺失的方法。致突变 PCR 可分为 2 种类型：构建突变体库的随机错掺 PCR 和定点突变 PCR，其中构建定点突变序列的方法主要包括重叠延伸 PCR 构建定点突变序列、大引物 PCR 构建定点突变序列、重组 PCR 构建定点突变序列和环状质粒 PCR 构建定点突变序列四种类型。

常规的 PCR 扩增需要进行细菌培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增，操作繁琐， 耗时较长，同时在反复的操作中 DNA 量损失也较大，产率较低。在 1989 年 Gussow Clackson 建立了菌落 PCR (colony PCR) 法，菌落 PCR 与我们通常的普通 DNA 的 PCR 的不同在于，直 接以单个菌作为模板。是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落，操作简单、快

融合 PCR 是通过 PCR 的方法，将两段 DNA 序列连接到一起，处于相邻位置。一般来说, 融合 PCR 设计的引物序列的 5』端和 3'端各包含一段待融合的模板序列，这条引物相当于衔接头，将两段 DNA 序列连接到一起。融合 PCR 技术最常用于全长序列的拼接，现在随着技术的发展，逐步应用于基因的破坏、基因的标记、序列缺失、两种基因的融合等领域。

当今，PCR 技术已成为分子生物学领域一种有力的研究工具，应用于现代分子生物学各个方面。人们发明各种各样 PCR 方法来克隆基因，因而在基因克隆和载体构建上，PCR 技术得到广泛的应用，并业已成为传统重组基因技术的一种必要的补充手段。常规的克隆和重组 DNA 技术需要用限制酶对 DNA 片段进行消化和用连接酶将两个片段连接起来。但有时待克隆的基因没有合适的限制酶切位点，不能用常规的重组 DNA 技

PCR 在动物学中的应用利用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR) 技术，在分子水平上认识动物、了解动物和利用动物，从而进一步推动动物学研究进展。目前 PCR 在动物学中的应用方法主要有 4 种：微卫星 PCR 在动物分类和进化中的应用、巢式 PCR 在动物疾病诊断中的应用、T 接头介导 PCR 在转基因动物外源基因定位中的应用、环介导等温扩增技术在动物学中

以荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）活性的

细胞冻存是指利用加入保护剂的冻存液将细胞冻存于-175℃ 液氮中。目前常用的保护剂有二甲基亚砜（DMSO）和甘油，保护剂要求对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞，使用浓度范围在 5％-15％ 之间，常用浓度为 10％。DMSO 本身有毒，无需过滤或高压灭菌，而冻存液可以过滤除菌。

无精子症（azoospermia） 是指射出的精液离心沉淀后，经显微镜检查仍不见精子， 一般有两类原因， 一是睾丸有正常生精功能，由于输精管梗阻，使睾丸生成的精子不能排出体外；另一类是因为各种原因导致的睾丸本身生精功能障碍。

琼脂糖凝胶电泳可应用于：（1）DNA切胶回收；（2）DNA分离；（3）佐证DNA是否重组，质粒等是否切开以及其他分子生物学研究。

蛋白质的相对分子量即依据蛋白质的某些理化性质，如离心沉降、排阻层析、黏度以及带电性质等测定其分子量，得到蛋白质的相对分子量。目前，用于测定蛋白质的相对分子量的方法主要有两种：SOS- PAGE 法测定蛋白质相对分子量和凝胶过滤层析法测定蛋白质相对分子量。

通过细胞融合技术（如 PEG 诱导法）将产生单一抗体的一种免疫动物 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，这种由单个克隆细胞产生的抗体分子称单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）。经 HAT 选择培养基的选择，只有融合成功的杂交瘤细胞（既具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力，又具有免疫 B 淋巴细胞合成分泌特异性抗体的能力）才能继续生长，通过免疫学检测和单个细胞培养，最终获得

通过细胞融合技术（如 PEG 诱导法）将产生单一抗体的一种免疫动物 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，这种由单个克隆细胞产生的抗体分子称单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）。经 HAT 选择培养基的选择，只有融合成功的杂交瘤细胞（既具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力，又具有免疫 B 淋巴细胞合成分泌特异性抗体的能力）才能继续生长，通过免疫学检测和单个细胞培养，最终获得

骨豁肌源性成肌细胞能够培养从几种成年动物骨骼肌分离的成肌细胞，可用于（1）肌细胞的结构研究（2）肌细胞功能研究（3）对肌细胞的相关课题研究（4）临床细胞移植。

视神经损伤动物模型，英文名是 Animal models of optic nerve injury。目前，用于视神经损伤动物模型的方法主要有 3 种：眼眶钝挫伤冲击视神经损伤动物模型、眼球钝挫伤冲击视神经损伤动物模型和简易视神经损伤动物模型。视神经损伤系指视神经受到冲击伤后，视功能部分或完全受损的外伤性病变。视神经损伤按照受伤原因分为车祸伤、坠落伤和打击伤等，其中最常见的是车祸伤。由于解剖结构和

葡萄膜炎动物模型，英文名是 Animal models of experimental autoimmune uveoretinitis。目前，用于葡萄膜炎动物模型的方法主要有 2 种：IRBP 视网膜抗原诱导葡萄膜炎动物模型法和过继转移诱导葡萄膜炎动物模型法。葡萄膜炎是一组累及葡萄膜，视网膜、视网膜血管及玻璃体的炎症性疾病，多发生于青壮年，易反复发作，治疗棘手，常因不可逆转的并发症而导致患者视力

青光眼动物模型，英文名是 Animal models of glaucoma。目前，用于青光眼动物模型的方法主要有 7 种：激光诱导的青光眼动物模型、高渗盐水诱导的青光眼动物模型、皮质类固醇诱导的青光眼动物模型、甲基纤维素诱导的青光眼动物模型、血细胞诱导的青光眼动物模型、烧灼巩膜上静脉诱发的青光眼动物模型和自然青光眼动物模型。

白内障动物模型，英文名是 Animal models of cataract。目前，用于白内障动物模型的方法主要有 8 种：亚硒酸盐诱导白内障模型、半乳糖性白内障模型、钝挫伤白内障动物模型、穿通伤白内障动物模型、紫外线辐射性白内障动物模型、辐射性白内障动物模型、先天性白内障动物模型-手术造模法和先天性白内障动物模型-药物致畸法。

心气虚证动物模型，是以心悸，精神疲倦，或有自汗，面白舌淡，脉弱等为常见症的证候。目前常见的造模方法有五种：睡眠剥夺法、控食以及大剂量普萘洛尔复合造模法、控食、游泳及大剂量普萘洛尔灌胃法、睡眠剥夺加腹腔注射重体后叶素复合方法、高胆固醇性免疫损伤加慢性放血法等。

心气虚小鼠心肌细胞模型，是以缺氧作为心气虚证的模拟病因，从而导致心肌的缺血，心功能损害。目前，心气虚小鼠心肌细胞模型的建立方法为心肌细胞缺氧再给氧损伤法。

心气虚血瘀证动物模型，再现了正常大鼠从以血瘀为主要损伤到形成心气虚证的过程，具有时相性、功能性和与功能相关的组织结构物质性改变的特点。目前，建立 Wistar 大鼠心气虚血瘀证动物模型的方法采用冠状动脉结扎法。