遗传学实验

体细胞内姐妹染色单体互换（SCE) 的细胞遗传学分析有两点要求：①有足量的活跃增殖细胞以提供足够数量的分裂相；②通过某些标记或染色方法能将姐妹染色单体区分开。

在临床中染色体的研兄通吊需要用除肿瘤组织外的一些固体组织，这是基于以下两个原因之一：一些患者只能通过组织活检获得固体组织样本，或者因为怀疑有嵌合现象需取组织而不是取标准的外周血淋巴细胞进行检测。

为确保每例标本培养成功，可采取每例标本用两种不同的大量培养基，每种要含独立分装的多量胎牛血清（FBS)。而且这两种方案最好放在有独立的 CO2 供源的不同培养箱中培养。

绒毛的间质中心包括一系列细胞成分—成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞，以及大量的细胞间质。绒毛中心的成纤维细胞能够在体外快速增殖，是细胞遗传学分析的合适材料。

在变性聚丙烯酰胺凝胶上分离，并用放射自显影可视化后，通过 DNA 测序步骤 (所谓的循环测序）筛选候选基因用于突变。

目标序列在患者样本中存在非常低的拷贝，选用巢式引物用两个连续的循环进行聚合酶链反应（即 PCR) 的方法扩增。在许多情况下，编码序列以及内含子侧翼序列中间的间接供体/受体位限制区域是最容易发生突变的，限制在这些区域进行分析的方法是可取的。

这一单元介绍了获得基因组DNA(>500kb至>5Mb) 限制性图谱的方法，可用于分析插入大片段的克隆。

在设计 MAC 实验时，需要做出大量选择——标本制备的方法、细胞表型分析的方法、细胞基因型分析的方法、是否表型和基因型能被同时分析或连续分析。用 APAAP 和吉姆萨复染的免疫学对表型的分析适合于所有类型的细胞和准备，是检测抗原最为敏感的技术之一。

该部分提供的所有技术适合于从任何来源的组织制备中期和早中期染色体（加长的，高分辨）。可根据需要和可用的设备选择不同的染色技术（光镜或荧光显微镜）。其他的染色体鉴别技术包括 G-ll 显带，以及应用特异染色体探针的荧光原位杂交技术。核型作图和染色体分析方法在附录 3K 部分，以及在对不同组织应用特殊细胞遗传学分析的章节中。

本方案基于一种 DNA 测序反应，该反应测定紧邻测序引物（在方案中称为 SNP 引物）3'端的一个碱基的性质。SNP 引物设计成可以紧邻于待分型 DNA 的多态位点上游夏性。当目的 DNA 和合适的经染料标记的终止分子（terminator) 以及 DNA 聚合酶温育时，在多态位点出现的等位碱基的互补碱基使 SNP 引物延伸。通过检测组装的终止分子类别，就能推知目的 DNA 上出现的等位碱基

本单元讲述了 5'-核酸酶等位基因特异性分析或 TaqMan 法在单核苷酸多态（SNP) 分型的应用。

当有大量的样本，多个微卫星标记需要分型时，需要本单元描述的分型方法。例如，用全基因缉的方法做一个疾病的连锁分析研究，需要在 500 个个体里检测 300 个标记，这样就要 150000 次基因分型。本单元描述的技术是用 Perkin-Elmer 的自动 DAN 测序系统，但也可以修改用于其他的自动荧光测序系统。

SSLP 是含有短的简单序列重复的 DNS 片段，如 (CA)，这些重复分散存在于真核基因组 DNA 中。由于这些 SSLP 在长度上的多态，即等位基因间重复次数的多态，SSLP 是非常有用的遗传学标志。用这些方法达到自动化分型每个标志的关键步骤是选择合适的重复单元侧翼序列的 PCR 引物。

单精子分型指的是分析个体雄配子的 DNA 序列。它可以检测单个个体的重组以及其他遗传现象。精子分型的一个优点体现在需要大样本量的遗传研究中，如一份精液样本中的精子数目对于任何研究目的来说都是取之不尽的。

本实验来源第四军医大学官方网站

染色体是由包含基因组成的实体，显微镜下所见仅为大体结构。基因是分子水平的核苷酸序列，能否使之成为显微镜下可见物用特殊的方法也可使之在染色体上显现出来和确定某一基因在某一号染色体上的位点， 此种方法称基因定位。内容来源：组织培养和分子细胞学技术。（北京出版社）

微核试验（MicronucleusTest）是70 年代初发展起来的快速、简便检测环境致癌物的方法。微核是在间期细胞时能观察到的染色体畸变后遗留物，在癌症患者末梢血淋巴细胞胞浆中，表现有一定的规律性。内容来源：组织培养和分子细胞学技术。（北京出版社）

姐妹染色单体差别染色法（SCD）是70 年代发展起来的技术，可以使中期染色体的两条染色单体着色深浅不同，能借以观察姐妹染色单体互换（SCE）现象。SCE 是两条染色单体在DNA 合成中核苷酸序列发生互相交换的现象。内容来源：组织培养和分子细胞学技术。（北京出版社）

显示染色体主要是显示分裂中期细胞。因细胞分裂处于中期时，染色体的长短和大小恰到好处，是研究染色体的最好阶段。内容来源：组织培养和分子细胞学技术。（北京出版社）

在间期细胞核中，女性X 染色质和男性Y 染色质均可用特殊染色法显示出来。内容来源：组织培养和分子细胞学技术。（北京出版社）