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        衣藻的遗传技术(四分体分析) 实验

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

        来源:丁香实验

        操作方法

        配子发生

        1. 在含 M 或 TAP 培养基的琼脂平板上生长细胞苔层。配子最容易从成熟但不老的细胞苔层获得。2 周以内的培养物最好,但较老的平板培养物常与一些细胞株一起使用。 2. 用接种环取 1 环细胞,重悬在 1 ml 灭菌蒸馏水中。 3. 光照下 3~4 小时,使配子发生。

        交配

        1. 在 96 孔皿的 1 个孔中混合基本等量的 mt+ 和 mt- 配子。 2. 光照 2 小时,用相差显微镜或 DIC 显微镜取 1 滴交配混合液分析交配效果。 3. 将 1 滴交配混合液滴到琼脂平板中心。 4. 直接涂布混合液,覆盖约 1/3 表面。

        合子成熟

        1. 光照 18~24 小时孵育合子。 2. 再强力塑料包装材料包裹平板,再用铝箔封好,放黑暗中至少 5 天。平板可在黑暗中数月保持活力,也不会干燥。如果 5 天后所有合子萌发形成八细胞,将细胞在黑暗处放更长的时间。黑暗孵育更长时间通常会得到更高的四细胞萌发百分率。

        合子萌发

        1. 打开平板包装,将表面用灭菌的单刃剃刀片刮几次。 2. 平板光照至少 18 小时。 3. 用立体解剖显微镜将合子放到平板上,用纤维光源照亮平板。 4. 用圆头玻璃针,将萌发的四分体的 4 个细胞推压分开大约 5 mm,形成一个圆圈。 5. 平板光照 1 周,使子代长成克隆。定期检查平板有无真菌生长,真菌孢子可能在打开平板进行解剖时进入。用灭菌剃刀片除去真菌污染。 6. 约 1 周后,

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