细胞实验

细胞培养至适当密度，用1H -胸腺嘧啶脱氧核苷标记 30min，清洗后固定细胞，除去未掺入的前体物，准备同位素放射自显术。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

通过冲洗单层培养物或通过离心重悬非贴壁细胞，以高浓度抗生素清洗培养物数次，然后将培养物传代，用加抗生素的培养基传三次，再用不加抗生素的培养基传三次，每次传代后都要检测是否污染。

收集血液，使其凝固，分离血清。通过孔径逐级减少的过滤器过滤血清。分瓶，包装，冷冻保存。

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

通过右旋糖酐促沉降作用去除红血细胞后，将枸橼酸或肝素抗凝的全血或血浆层加在致密的 Ficoll-Hypaque 层上面。离心后，大部分淋巴细胞位于 Ficoll-Hypaque 和血浆之间的界面。

以低密度接种细胞，温育直至集落形成，染色与计数集落来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

以三种不同细胞浓度进行系列细胞培养，每天计数细胞直至平台期。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

在无抗生素情况下，至少将细胞培养一周，将培养上清转移至处于对数生长早期的指示细胞中，孵育 3~5d ，将细胞固定和染色，寻找细胞核之外的荧光。

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

以三种不同的细胞浓度在多孔板中培养三组细胞，在达到平台期之前，每天计数一个板中的细胞。

将培养物移至另一培养箱，关闭空培养箱电源，然后用去污剂和乙醇擦洗，开启加热开关，以便使培养箱干燥。盘中换新鲜水，重新通入 CO2。

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

在传代培养之后，细胞会呈现出延迟期、指数或对数期和静止期（平台期）所特有的生长形式。对数期和平台期能提供细胞系的重要信息，而指数生长期可给出它们的 PDT ，平台期给出最大的细胞密度（即饱和密度）。PDT 的测定可用于细胞对不同的抑因子或刺激性培养条件，如不同营养浓度、激素作用或有毒药物反应性的定量研究。对于连续传代也是一种良好的监视指标。它能计数细胞产量，以及传代时所需的稀释度

固定细胞，顺序加入一抗和二抗，通过 UV 光观察。

配制储存浓缩液并冷冻保存。需要的时候解冻、混合、无菌过滤、保存。

收集细胞，用 D-PBSA 洗涤，重新制成 5×107个/ml 的细胞悬液，制备细胞抽提物并置于 -70°C 保存。准备凝胶装置，取 1~2 μl的细胞抽提物、标准品及对照点样于琼脂糖凝胶。槽内充满液体，将琼脂糖凝胶置于其中，电泳 25 min，加入酶反应试剂，孵育 5~20 min 后，冲洗凝胶，干燥，检査已完成的凝胶酶区带的显示。