细胞实验

由于有丝分裂期成熟促进因子(maturation promoting factor,MPF)的活性很高,用 M 期细胞和间期细胞进行融合，可以使间期细胞出现类似于有丝分裂期的形态变化：染色质凝集、核膜崩解、核仁消失等。这种经过诱导而在间期细胞中形成的染色体称为提前凝集染色体或早熟凝集染色体(prematurely condensed chromosome,PCC)。

端粒酶是一种能够以自身 RNA 为模板合成端粒 DNA 的反转录酶，通常认为，端粒酶由蛋白部分以及 RNA 部分构成，RNA 部分（telomerase RNA，简写成 TR 或 TERC）是端粒合成的模板，其蛋白部分至少包括两个亚基，大亚基为端粒酶反转录酶（telomerasereverse transcriptase，TERT），其内部具有底物--端粒的结合位点，dNTP 结合的催化位点以及模

目前，一氧化氮合酶显示实验主要有两种：一氧化氮合酶组化显示实验和一氧化氮合酶免疫组化显示实验。组化法是细胞中的左旋精氨酸和氧在一氧化氮合酶（nitxic oxide synthase，NOS）的作用下生成一氧化氮和瓜氨酸。还原型辅酶II（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，NADPH）是一氧化氮合酶的辅酶，可以将孵育液中的底物脱氢，然后将氢传递给硝基四氮唑蓝（NBT），使后者还原成蓝黑色沉淀。一氧化氮合酶按

DNA是细胞的重要生命物质，是遗传信息的携带者和储存载体，决定所有生物体的遗传性状。在真核细胞中，DNA主要存在于细胞核中，在线粒体和叶绿体中也有少量分布。RNA在生命活动中同样具有重要作用，目前认为和蛋白质共同负责基因的表达及其调控。在真核细胞中，DNA主要存在于细胞核中，而RNA是在细胞核内合成，然后转移至细胞质指导蛋白质的翻译过程。DNA以双螺旋空间结构形式存在，而RNA通常呈单链形式，局部

高等动物体内存在着具有防御功能的吞噬细胞系，它是由单核细胞和粒细胞等白细胞构成，是机体内免疫系统的重要组成部分。在白细胞中，以粒细胞和单核细胞的吞噬活动较强，故被称为吞噬细胞。

纤毛与鞭毛是单细胞或多细胞生物细胞表面伸出的特化结构，其内部是由微管组成的轴（轴中央由 2 条微管组成，外围由 9 组二联微管环绕），轴的基部与基体相连，周围被细胞膜所包绕。直径为 0.15～0.3 μm，属于细胞的运动器官。其运动一般认为是由二联微管间的滑动所引起，鞭毛运动方式为波浪式、纤毛运动为波动式。

微管是真核细胞普遍存在的结构。它是由 a、β 微管蛋白异二聚体和少量微管结合蛋白聚合而成的中空管状纤维。在不同类型的细胞中，微管具有相同的基本形态。微管中的单管在胞质内呈网状或束状分布；二联管构成纤毛、鞭毛的周围部分；三联管构成中心粒以及纤毛、鞭毛基体。观察微管可用电镜和免疫细胞化学技术，其中较常用的有间接免疫荧光法。

胚胎干细胞是具有一种具有自我更新和全能分化能力的细胞，能发育分化出成体所有的组织和器官，是体外研究发育调控机制最为理想的模型，也是用于人类疾病的干细胞治疗和器官组织移植最理想的种子细胞。建立新的人类胚胎干细胞系仍然有很大的伦理学争议，目前对人胚胎干细胞的研究主要就是基于已经建立的人胚胎干细胞系的研究。

真核细胞胞质中纵横交错的纤维网称为细胞骨架。根据纤维直径、组成成分和组装结构的不同分为微管、微丝和中间纤维。目前观察细胞骨架的手段主要有电镜、间接免疫荧光技术、酶标和组织化学等。微丝是肌动蛋白构成的纤维。单根微丝直径约 7 nm，在光学显微镜下看不到。在不同种类的细胞中，它们与某些结合蛋白一起形成不同的亚细胞结构，如肌肉细丝、肠上皮微绒毛轴心和应力纤维等。本实验用考马斯亮蓝 R250（Coomas

细胞融合（cell fusion）是指在自然条件下或用人工诱导的方法将两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的过程，包括质膜的连接与融合、胞质合并，细胞核、细胞器和酶等互成混合体系。细胞融合可分为同种细胞的融合和异种细胞的融合。其中异种细胞的融合也称体细胞杂交（somatic hybridization），是指在离体条件下用人工方法把不同种的细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。细胞融合的方法有生

生物膜是细胞的重要结构，在真核细胞中它包括了包裹细胞的质膜和包裹细胞中内质网、线粒体、高尔基复合体、溶酶体等细胞器的内膜，其基本结构为脂类构成的脂质双分子层，各种蛋白质镶嵌其中完成诸如物质转运、酶反应、信号转导、结构连接等一系列功能，完整地反映生物膜在不同细胞中的结构及分布情况，对认识和了解细胞整体结构及功能具有重要意义。

细胞中液泡系活体染色实验是利用中性红（neutrol red）是液泡系的专一性活体染色剂的特性，在细胞处于生活状态时，只将液泡系染成红色，细胞质和细胞核不被染色。

胚胎干细胞是具有一种具有自我更新和全能分化能力的细胞，能发育分化出成体所有的组织和器官，是体外研究发育调控机制最为理想的模型，也是用于人类疾病的干细胞治疗和器官组织移植最理想的种子细胞。

细胞增殖实验最常用的测定方法，包括：直接计数法、3 H-TdR 掺入法、MTT 法、BrdU 法以及应用 CFSE 测定细胞增殖等，特殊细胞的形态学检测法（如 T 淋巴母细胞）也可用于细胞增殖情况测定，近年来以 BrdU 掺入法和 CFSE 染色流式细胞术检测法较为普遍。目前，用于细胞增殖检测实验的方法主要有 5 种：直接计数法、BrdU 检测法、CFSE 染色法、3 H-TdR 掺入法和噻唑蓝比

细胞因子依赖的其他免疫细胞是通过分离获取肿瘤患者自身免疫细胞，在细胞因子的诱导下，大量扩增出具有高度抗肿瘤活性的免疫细胞，再回输到患者体内，此类细胞包括 LAK 细胞、TIL 细胞、CIK 细胞、DC 细胞、CD3AK 细胞以及 AKM 细胞等。

细胞复苏是将冻存在液氮中的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。

三维（3D）细胞培养是指将具有三维结构不同材料的载体与各种不同种类的细胞在体外共同培养，使细胞能够在载体的三维立体空间结构中迁移、生长，构成三维的细胞和载体复合物。根据培养方式不同可分为静止三维细胞培养和动态三维细胞培养，常用三维细胞培养模式包括：基质覆盖培养、旋转烧瓶培养、微载体培养、预置支架培养以及旋转细胞培养系统等，其主要技术路线是：首先对细胞进行常规二维培养，待细胞长满单层后，用胰蛋白酶消

淋巴细胞增殖试验，通常是在有丝分裂原等抗原性物质的刺激下发生的增殖、分化，转化为淋巴母细胞过程，也称为淋巴细胞转化实验（lymphocytetransformation test，LTT）。目前，淋巴细胞增殖试验主要有 2 种：T 淋巴细胞增殖试验和 B 淋巴细胞增殖实验。

混合淋巴细胞增殖实验也称混合淋巴细胞培养（MLC）或称混合淋巴细胞反应（MLR），常用于器官移植前的组织配型，以测定受体和供体主要组织相容性抗原（HLA 抗原）相容的程度。

在培养过程中，ASCs 可在很长时间内保持未分化状态。ASCs 具有成纤维细胞样形态，胞内缺乏脂肪细胞中所见的脂滴。体外扩增后，ASCs 的表型会发生改变，主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化。ASCs 的表型与骨髓和骨骼肌来源的干细胞相似。免疫组化染色发现，诱导的 ASCs 可以表达神经细胞标志物，包括 NeuN、MAP2、tau、β-Ⅲ微管蛋白和 NSE, 可表达的神经胶质细胞标志物，包