• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        收藏
        wx-share
        分享

        超速离心法纯化病毒实验

        实验分类:

        微生物实验

        最新修订时间:

        简介

        病毒粒子经过初步浓缩之后,要进一步纯化,通常采用超速离心法 (ultracentrifugation)。来源:《病毒学检验》

        来源:丁香实验

        操作方法

        差速离心法

        将被分离的样品交替进行低速离心与高速(或超速)离心。差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附-释放的病毒悬液中提纯病毒。在由感染细胞或组织匀浆中提取病毒时,由于与病毒大小相近的细胞亚单位及碎片的存在,提纯效果不理想。以差速离心法分离提纯病毒时,经常以低速 (2 000~3 000 r/min, 20~30 min) 及中速(10 000 r/min,20~30 min) 去除较大的宿

        密度梯度离心

        (1) 根据病毒的密度选择适宜的溶质,用梯度制备仪制成适宜的梯度介质,病毒的密度最好包括在梯度介质的中部或近介质底部 1/3 处。(2) 将欲纯化的病毒悬液约 1 ml 小心铺加于梯度介质,以 20 000g~40 000 g 离心 2~4 h离心速度和离心时间的选择可根据病毒的大小而定,如流感病毒需 28 000 g,而如乙脑病毒则应40 000g 。(3) 病毒沉于介质的中部形成一明显的沉淀带

        等密度梯度离心

        在每毫升病毒悬液中,加入 CsCl 约 1 g, 混匀,4℃以 40 000g 离心24~36 h 。可重复 2 次,所得的病毒纯度比其他方法高。

        界面离心分离法

        (1) 取浓缩后的病毒悬液 5 ml, 加入 1/5 或 1. 66/5 体积的 600 g/L 的蔗糖溶液,使其含蔗糖10%~15%, 摇匀。(2) 取一内盛 4 ml 40%~60% 的蔗糖溶液的离心管,将上述病毒悬液小心铺加于此蔗糖溶液上面,于 20 000~40 000g( 根据病毒的大小和密度而定)离心 60~90 min血病毒在两个界面间形成一条明显的带。(3) 小心用毛细吸管或注射针

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序