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        基于 RNA 干扰的动物基因敲低技术

        实验分类:

        实验动物

        最新修订时间:

        简介

        RNAi 是一种通过体内的剪切形成小的(大约 21nt)双链 RNA,而其中的反义链与靶向基因的转录本互补,形成的双链结构介导持续的靶向基因的降解,从而使得靶向基因沉默。与基因敲除相比,RNAi 介导的基因沉默更加快速,节约高效,其广泛地被用于功能基因组的研究,也非常适应研究广泛生物的同源基因。

        原理

        基于 RNAi 的 knock-down 的技术原理是使用 II 型启动子转录长的反向互补长片段,经过转录形成长的发卡结构转录本,经过细胞内的 RNA 加工形成双链的短的干扰 RNA;同样可以通过单个 II 型启动子启动反向互补的目标 siRNA 序列形成一个发卡结构,最终经过剪切形成双链 siRNA;使用两个 II 型启动子启动短的 RNA 退火形成双链短 RNA;以及表达 miRNA 在体内形成可 knock-down 的短单链 RNA。这些载体都最终形成 RISC,随后形成组织 mRNA 的剪切或降解,从而使得目标基因沉默。

        来源:丁香实验团队

        操作方法

        基于 RNA 干扰的小鼠 PKD2 基因敲低

        RNAi 是一种通过体内的剪切形成小的(大约 21 nt)双链 RNA,而其中的反义链与靶向基因的转录本互补,形成的双链结构介导持续的靶向基因的降解,从而使得靶向基因沉默。与基因敲除相比,RNAi 介导的基因沉默更加快速,节约高效,其广泛地被用于功能基因组的研究,也非常适应研究广泛生物的同源基因。

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