分光光度计测定溶液的吸光值

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

测吸光值

原理

蛋白质纯化实验中，将会测定 b-glucuronidase （GUS）的活性，是利用 p-nitrophenyl b-D-glucuronide 为基质，加入酵素反应后所释出之 p-nitrophenol 在碱性下呈现黄色，可测定 415 nm 之吸光度，利用 Beers Law 即可计算求得反应物之生成量。本实验将利用已知浓度之 p-nitrophenol,测定其 A415,以求取 p-nitrophenol 在 GUS 活性测定条件下之消光系数（extinction coefficient）。

应用

含量测定

来源：丁香实验

操作方法

分光光度计测定溶液的吸光值

1）配制5 mM p-nitrophenol stock solution: 秤取 _____ mg p-nitrophenol,置于400 mL 烧杯中，加入25 mL 10×GUS assay buffer,加水至约200 mL,搅拌溶解后，加水至250 mL 并混合均匀。请配制三份。2）配制50 μM p-nitrophenol 溶液：分别由三份stock solution 取适量以1×