mRNA 的分离实验

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

哺乳动物细胞的绝大部分mRNA 在其3‘ 端均有一poly（A）尾，因此可以用oligo（dT）-纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离 mRNA。在构建 cDNA 文库时，必须经上述纯化步骤制备 mRNA 模板。进行 Northern 杂交或 Sl 核酸酶作用图分析时，与总 RNA 相比，采用poly（A）+RNA能获得更为满意的结果。

来源：丁香实验

操作方法

oligo（dT）-纤维素亲和层析法

1. 用0.1mol/L NaOH悬浮0.5～1.0 goligo（dT）-纤维素。 2. 将悬浮液装入灭菌的一次性层析柱或装入填有用DEPC处理并经高压灭菌的玻璃棉的巴斯德吸管中，柱床体积为0.5～1.0ml，用3倍柱床体积灭菌水冲洗柱床。柱床体积为1ml的oligo（dT）-纤维素最大量为10 mg总RNA，如果总RNA的量较少，则应减少oligo（dT）-纤维素的使用量，以防止poly（A