免疫学实验

作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

新合成的IL-18是无信号肽的前体分子，被酶解后才能活化。在 本 E L I S A 方法中，为了 只 检 测 成 熟 （活化）的 IL-18,包被抗体必须对活化的IL-18具有特异性。一些细胞 （如 人 P B M C ) 在正常条件下也可以分泌IL-18前体，这些细胞的培养上清液可以被用来检测一种或两种形式的IL-18。使用抗人或小鼠IL-18的单克隆抗体的混合物可检测 IL-18前 体 和

E L I S A 方法可被用来检测培养上清和血清样品中的人IL- 1 5 。 这种方法也可用来检测 猴 的 IL-15,但必须使用重组猴IL-15作为标准来修正所得数据作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

ELISA对人或小鼠IL-13 高度特异性，不识别样品中的其他细胞因子。作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

此为特异性检测IL-12异二聚体的方法。因为不能检测IL-12 p4 0 单 体 ，因此本方法能够在过量IL-12 p4 0 亚基存在的情况下检测IL-12 p7 5 异二聚体。作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

本方案在E LISA方法中釆用小鼠IL- 1 0特异性的抗体检测小鼠IL- 1 0 , 不能检测人或病毒的IL-10。 使用针对其他种属的抗IL- 1 0 的抗体按照相同的操作流程可以检测其他种属的IL-10。 本方法具有高度特异性，对测定样品中存在的其他细胞因子不敏感。作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

介绍 了 使 用 鼠 IL-2和 IL- 4 的中和抗体，在一种细胞因子存在的情况下来检测并定量其中一种细胞因子的方法。由于小鼠细胞不能针对人IL- 4产生应答，使用细胞株对建立人IL- 2 的特异性测定方法非常有用。可供选择的方法还有采用人IL- 4 受 体 cD N A转 染 的 CT.4S 细胞测定人 IL- 4 , 如 CT.h4S 细胞。这 些 细 胞 对 IOpgAnl的 人 IL-

作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

由于酪氨酸蛋白激酶（T P K ) 的低丰度表达及其快速活化与失活，使之很难利用常规的生化途径进行纯化。通过免疫复合物蛋白激酶实验，可检测特定T P K 的存在与否及其功能状态。

作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

受 体 介 导 的 磷 脂 酶 C (P L C ) 的 活 化 引 起 膜 肌 醇 磷 脂 的 水 解 ，产 生 二 酰 甘 油(D A G ) 和水溶性肌醇磷酸。 T 细胞和B 细胞抗原受体均利用此信号机制，因此，该机制可能介导了受体诱导的胞外Ca2+ 内流过程。作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

可通过将活化的T 细胞和肿瘤细胞融合获得T 细胞杂交瘤。异质性的杂交瘤可以通过有限稀释法克隆获得表达特异性T 细 胞 受 体 （T C R ) 的杂交瘤。杂交瘤可以在缺乏生长因子的条件下大量的扩增。研究证明，杂交瘤对研究T C R 特异性识别抗原以及C D 3-T C R 复合物的生物化学和分子生物学是非常有用的。作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

本单元提供了建立特异性T 细胞克隆的方法。注意该方法成功的关键是选择和制备条件培养基。作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

本单元介绍几种诱导细胞毒性 T 淋巴细胞并检测其活性的实验方案请记住，原则上任何种类的细胞都可以用来作为检测 C T L 活性的靶细胞，但最好的靶细胞是淋巴母细胞、组织培养细胞或者肿瘤细胞等活化细胞。作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

本单元介绍用磁性分离技术分离 T 细胞、 B 细胞，以 及 T 细胞亚群的方法。作者：J.E.科利跟等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

介 绍 IgG的纯化方法作者：J.E.科利跟等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

基于 PCR 的克隆方案利用了可变区中框架区和先导区的保守序列，尽管用框架区中的保守序列可合成引物，用于克隆可变区，但会引起框架区中氨基酸的改变，从而影响抗原结合。因此，用保守的疏水先导序列合成引物是比较好的方案。