细菌中重组蛋白的大量提取实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

来源：《蛋白质与蛋白质组学实验指南》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

①4℃、3000g离心15min收集细菌。②用裂解缓冲液洗细胞，除去残留的培养基。重复步骤①，离心收集洗过的细胞。③倒出上清，称沉淀的湿重。④每克细胞沉淀用约3ml裂解缓冲液重悬，4℃条件下搅动悬浮液30min。如果沉淀物在30min后没有完全悬浮，用韦林搅切器低速混合悬浮液1min。⑤加溶菌酶至终浓度1g/L，并在4℃条件下孵育35min，温和振荡。增加溶菌酶的浓度至10mg/ml，可以加速裂解