分隔式自我复制（聚合酶和其他酶的定向进化的一个新方法）实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

分隔式自我复制（CSR)是蛋白酶，特别是聚合酶，定向进化的一种新方法。在 CSR 最简单形式中，它包括一个简单的环路反馈，即聚合酶只复制编码自身的基因 (自我复制）。自我复制发生在一个热稳定的油包水乳化液形成的离散、分离、没有交互的空间中。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。

来源：丁香实验

操作方法

分隔式自我复制（聚合酶和其他酶的定向进化的一个新方法）

下面的实验流程详细描述用 CSR 在 E.coli 中对 Taq 聚合酶突变体的筛选。这个方法保证在标准的 PCR 反应条件下，聚合酶突变体是有活性的。用来产生文库的方法是核苷酸类似物 [27] 和易错 PCR [28]，这里不再描述。引物 1 ( 5'-C A G G A A A C A G C T A T G A C A A A A A T C T A G A T A AC G AG G G