核糖体失活展示系统实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

在这里我们介绍一种在体外将基因型和表现型相联系的新策略，用来选择功能蛋白质。这个策略里，蓖麻蛋白的 A 链在翻译时被激活，因此不需要去掉终止密码子，就能形成核糖体、信使 mRNA 和翻译出蛋白质的稳定复合物。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。

来源：丁香实验

操作方法

核糖体失活展示系统

这里介绍的方法概括了表达载体的构建以及筛选功能蛋白的 RIDS 循环系统的构建。 3.1 RIDS 表达载体的构建首先，需要准备含编码 T7 启动子、蛋白质文库、连接子、RTA 和间隔区的 DNA 来构建 RIDS ( 图 13.2A )。13. 3.1.1〜13.3.3.3 部分详述了这个过程。尽管理论上用聚合酶链反应（PCR) 制备双链 DNA 是可行的，但是我们推荐用质粒来构建此 DN