由于蛋白分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,因此蛋白质具有吸收紫外线的性质,吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内,蛋白质溶液的光吸收值(A280)与其含量呈正比关系,可用作定量测定。
由于核酸在280波长处也有光吸收,对蛋白质的测定有干扰作用,但核酸的最大吸收峰在260nm处,如同时测定260nm的光吸收,通过计算可能消除其对蛋白质测定的影响,因此溶液中存在核酸时必须同时测定280nm及260nm之光密度,方可通过计算测得溶液中的蛋白质浓度。
蛋白质紫外分光测定实验一、试剂
1.标准蛋白溶液
准确称取经微量凯氏定氮法校正过的标准蛋白质,配制成浓度为1mg/ml的溶液。
2.待测蛋白溶液
配制成浓度约为1mg/ml的溶液
二、操作
1.标准曲线的绘制
按下表分别向没支试管加入各种试剂,摇匀。选用光程为1cm的石英比色杯,在280nm波长处分别测定各管溶液的A280值。以A280值为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标,绘制标准曲线。
2.样品测定
取