蛋白质实验

本实验介绍免疫亲和层析的方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍PEI 沉淀法分级分离可溶性提取物的过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍大肠杆菌细胞的破碎和包涵体的制备。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍肝素-Sepharose CL-2B 的制备过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

在本实验中, 我们用 DNA 亲和层析所用的同一互补寡核苷酸 (具体序列见实验 3 的引言的末尾) 来进行 AP-1 的凝胶迁移率变动分析。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍亲和层析的相关操作。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍DNA 亲和介质的制备过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍如何用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍HeLa 细胞核提取物的 Sephacryl S-300 HR 柱层析过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍如何装填凝胶过滤柱的方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

在本实验中，基本上是按Dignam等（1983)所述的方法从HeLa细胞制备核提取物的。这一基本方法大概是制备体外转录和DNA结合实验用因子的最常用的方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍钙调蛋白的胰蛋白酶消化过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍钙调蛋白的溴化氰裂解过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

Goldenberg 和 Creighfn(1984) 引入用含尿素浓度梯度的聚丙烯酰胺凝胶来分析蛋白质的折叠状态。对该操作程序的进一步描述连同技术考虑和理论解释均可见于 Goldenberg(1989) 的文献。下面的操作程序是根据 Goldenberg 和 Creighton(1984) 及 Goldetiberg(1989) 的文献改进而成的。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚

本方案是经多年实践形成的，它不是用 HIC 层析纯化蛋白质的首次尝试的范例。对钙调蛋白来说，苯基-Sepharose 是优先选择的 HIC 填料。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

纯化钙调蛋白的下一步操作是用 DEAE 树脂进行阴离子交换层析。这步操作利用了以下事实，即钙调蛋内是一种强酸性蛋白因而在中性或微碱性 pH 条件下带有大量的净负电荷。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

为纯化钙调蛋白，对平滑肌组织提取物的粗分级分离采取了两步不同的操作：硫酸铵沉淀和等电点沉淀。这两步操作利用了钙调蛋白的两个不同的性质，即它在中性以上 pH 条件下的高溶解度和它的酸性等电点。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

钙调蛋白存在于所有哺乳动物组织，也存在于其他真核生物体。它是目前已知的最为普遍存在和高度保守的蛋白质之一。因为胗是一种丰富而又廉价的、且无太多血管、脂肪和结缔组织的平滑肌源。而平滑肌是一种极好的钙调蛋白源，且哺乳动物和鸟类的钙调蛋白完全相同，故用鸡的钙调蛋白不会危及它的特异性。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍钙调蛋白样品的测活过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

免疫电泳（immunoelectrophoresis) 技术是基于抗原的电泳迁移以及与抗体的专一性免疫亲和或沉淀反应来鉴定其强度和特异性。在大部分电泳中，样品中的抗原通过含有相应抗体的 pH 8.6 的薄层琼脂糖凝胶，抗原在 pH 8.6 时通常带强负电，与在含有抗体的凝胶中电泳时发生免疫反应。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编：郭尧君。