培养神经元原位杂交技术实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

原位杂交（inhybridization,ISH) 的目的是在细胞结构内显 TKmRNA 分子。在 ISH 步骤中要采用高温，这就对细胞的固定有特殊要求。如果原位杂交方法不能提供阳性的杂交信号，还可以应用其他的技术，如通过 mRNA 扩增来检测神经突起微小区域内的低丰度 mRNA 的存在（Miyashiroetal.1994)。

现代神经科学研究技术
作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻译：赵志奇陈军

来源：丁香实验

操作方法

培养神经元原位杂交技术实验

一、制备地高辛标记的探针将 cDNAs 克隆入 pBluescript 载体中。为了能在体外转录，质粒需经线性化或 PCR 然后根据插入 cDNA 的方向应用 T3 或 T7RNA 聚合酶合成反义 RNA 探针。体外转录之后，DNA 模板用 DNA 酶 I(无 RNA 酶）降解，cDNA 水解成大约 200 个核苷酸的片段。质粒的线性化：用合适的限制性内切酶在紧邻插入