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        cDNA文库的构建和筛选—在外界环境压力条件下,新表达基因的鉴定方法实验

        实验分类:

        DNA 实验

        最新修订时间:

        简介

        材料许多生物是疾病研究或探索使细胞和机体应对和存活于不同刺激下的分子适应机制的优良模型。 cDNA 文库的构建和随后目的基因的筛选可促使研究者发现在调节和响应某些外部特定环境压力中有重要作用,而在其他体系中可能不表达或者不存在的新基因。确定这些新基因的可读框,进一步分析其编码蛋白质的功能可以开创全新的研究领域并可以更科学地设计下一步的研究方案。
        作者:马丁,本实验来自「环境基因组学实验指南」

        来源:丁香实验

        操作方法

        cDNA文库的构建和筛选 —在外界环境压力条件下,新表达基因的鉴定方法实验

        一、材料 所有化学试剂均为分子生物学级纯度。所用塑料和玻璃制品,包括瓶子和移液器吸头均经高压蒸气灭菌。涉及核酸的操作均需带手套。 1.总 RNA提取 (1)无 RNase 水。加 I mL 焦 炭 酸 二 乙 酯(DEPC) (Sigma-Aldrich) 到 I L 水中(0.1%, V/V) , 搅 拌 过 夜(> 1 2 h),高压蒸气灭菌。这可使得存

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