• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        收藏
        wx-share
        分享

        用交换反应进行 5' 突出端 DNA 分子的磷酸化

        实验分类:

        DNA 实验

        最新修订时间:

        简介

        T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应(Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是,它无需 DNA 去磷酸化。正向反应在略偏酸性(pH 6.4)的咪唑缓冲液中进行,以刺激酶促去磷酸化 (Berkner and Folk 1977)。交换反应的最佳 Km 值(ADP 为 300 μmol/L,ATP 为 10 μmol/L),均比在试验管中容易达到的值高,因此标记效率很少超过 30%。然而,交换反应效率通过在反应混合物中加入亚精胺和聚乙二醇大为改善(Lillehauget al. 1976; Harrison and Zimmol/Lmerman 1986a)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

        来源:丁香实验

        操作方法

        用交换反应进行5'突出端DNA分子的磷酸化

        一、材料 1. 缓冲液和溶液 ADP (1 mmol/L) 乙酸铵(10 mol/L) ATP (10 mmol/L) EDTA ( 0.5 mol/L,pH 8.0) 乙醇 10X 咪唑缓冲液(500 mmol/L 咪唑盐酸(pH 6.4),180 mmol/L MgCl2,50 mmol/L DTT,1 mmol/L 亚精胺盐酸,1 mmol/L EDTA (pH 8.0))

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序