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        应用黏粒载体构建基因组 DNA 文库

        实验分类:

        DNA 实验

        最新修订时间:

        简介

        在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中的多联体。构建在 λ 噬菌体中的文库以具有感染性的重组噬菌体形式贮存和增殖。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

        来源:丁香实验

        操作方法

        应用黏粒载体构建基因组DNA文库

        一、材料 1. 缓冲液与溶液 氯仿 10 X 去磷酸化缓冲液(CIP 缓冲液) 乙醇 苯酚: 氯仿(1:1, V/V) SM 醋酸钠(3 mol/L, pH 5.2) TE ( pH 8.0) 2. 酶与缓冲液 T4 噬菌体 DNA 连接酶 牛小肠碱性磷酸酶(CIP) 限制性内切核酸酶:Bam HⅠ,MboⅠ,XbaⅠ 只切割黏粒载体而不切割基因组插入 DNA 的限制性内

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