中等量细胞克隆的杂交法筛选实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证没有气泡的情况下，用更大的滤膜很难正好覆盖于 150 mm 板。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

中等量细胞克隆的杂交法筛选实验

一、材料 1. 培养基 (1) 含有适当抗菌素的 LB 或 SOB 琼脂板（90 mm)。本方案中使用 2~3 天的旧板效果最好，因为旧板更容易吸收接种物中的水分。 (2) 含有氯霉素的 LB 或 SOB 琼脂板。氯霉素贮存液浓度应为 170~200 μg/ml。 2. 专用设备 (1) 硝酸纤维素膜（Millipore HATF，或相当产品）或尼龙膜，无菌无去污剂污染。 (2