以双链 DNA 为模板的体外诱变：用 DpnⅠ选择突变体实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本方案和方案 4 是以变性质粒 DNA 为模板，使用两条寡核苷酸和高保真聚合酶引导 DNA 合成。本方案中，经多轮热循环全长双链质粒 DNA 将以线性形式扩增，产生一种 DNA 双链上带交错缺口的突变质粒（Hemsleyetal.1989)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

以双链 DNA 为模板的体外诱变：用 DpnⅠ选择突变体实验

材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试剂的成分请参阅附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。 ATP(10 mmol/L) 含有四种 dNTF 的混合溶液，每一种 dNTP 浓度为 5 mmol/L 10X 长 PCR 缓冲液（用于混合的 DNA 聚合酶） 500 mmol/L Tris-Cl(室温下 pH9.0) 160 mmol/L 硫酸按 25 mmol/L MgCl2 1.5 m