寡核苷酸指导的单链 DNA 诱变实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本文介绍了由 Zoller 和 Smith 的双引物技术（1984,1987) 结合 Kunkel 的诱变体产量富集方法（1985) 构成的经典方案。本方案中使用的单链 DNA 模板含有较高的尿嘧啶残基，因为它们是从生长于 dut 和 ung 基因突变大肠菌中的 M13 噬菌体中制备的（见方案 1)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

寡核苷酸指导的单链 DNA 诱变实验

材料缓冲液和溶液各种贮存液，缓冲液和试剂成分请参阅附录 1。将贮存液稀释至所需的浓度。 ATP(10 mmol/L) 10xPE1缓冲液 200 mmol/L Tris-Cl(pH7.5) 100 mmol/L MgCl2 500 mmol/L NaCl 10 mmol/L DTT 10XPE2 缓冲液 200 mmnl/L Tris-Cl(pH7.5