建立随机重叠 DNA 插入文库实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

下面的方案描述了鸟枪法测序的起始步骤，从靶 DNA 的剪切到用 M13 噬菌体载体构建 DNA 片段文库，也包括断裂靶 DNA 的两种方法--超声法和喷雾法，以及用 DNA 聚合酶修复片段末端的技术要点。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

建立随机重叠 DNA 插入文库实验

材料缓冲液和溶液乙酸铵（10mol/L) ATP 乙醇甘油（无菌，100%) 水（去离子蒸馏水） IPTG MgCl2 NaCl 酚（pH7.6 Tris 饱和）酚：氯仿（1:1,m/V) 聚乙二醇（30% m/V PEG 8000) 溶于 2.5mol/LNaCl 可选用，参见步骤 1 聚乙二醇（20% m/V PEG 8000) 溶于 2.5mol/LNaCl