克隆化基因的体外转录和翻译实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此DNA克隆又称分子克隆，基因操作或重组DNA技术。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1. 亚克隆编码蛋白质的目的DNA片段于质粒载体的SP6或T7启动子的下游。 2. 通过CsCl/溴化乙锭离心或PEG沉淀制备质粒DNA。 3. 用位点在终止密码子的立即下游处（理想是50~200碱基）而不存在于蛋白质编码区中的限制性内切酶切割DNA。取小份样品在琼脂糖凝胶电泳中检测。 4. 酚抽提及乙醇沉淀纯化DNA，重溶于50 μl TE缓冲液。 5.