简并寡核苷酸诱变实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本方法的一个重要特点就是将单链的简并寡核苷酸转变成同源双链分子后直接克隆进常规载体。由于不同的寡核苷酸可通过其3’末端的回文结构杂交，因此，寡核苷酸实际上起互为引物的作用，在大肠杆菌DNA聚合酶I klenow片段作用下延伸。

来源：丁香实验

操作方法

小段DNA序列中产生大量突变

1. 设计寡核苷酸，其3‘端含有由8个核苷酸组成的回文结构，且包含某一限制性内切酶的识别位点；如果可能的话，5’端也应有一含某个限制性内切酶位点的序列。中间区段则应含目的诱变区。图一、简并寡核苷酸的设计 2. 寡核苷酸的合成。在无需突变的位置时，用一种核苷酸前体的同质溶液进行合成，而在需要突变的位置时，则用特定的核苷酸前体混合物来控制合成反应的进行。 3. 通