粘粒及质粒文库的铺平板和转移实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1. 在含抗生素的平板上，通过系列等比稀释确定质粒和粘粒文库的滴度，计算出最佳的铺平板用的细菌悬液量并稀释到5~10 ml LB培奍基中。 2. 准备一层无菌的10 cm 或15 cm的Whatman 3 MM 滤纸，故在玻璃布氏漏斗或瓷质过滤漏斗中，加入10~20 ml LB培养基。 3. 将标记好方向的硝酸纤维素滤膜放入含抗生素的LB平板中，并移至过滤装置，再将细菌悬液用吸管加