噬菌体文库的扩增实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1. 制备铺平板菌（1）2.5 ml 新鲜过夜培养的宿主菌液接种于250 ml 含0.2%麦芽糖和10 mmol/l MgSO4的LB培养液中。（2）在37℃恒温摇床剧烈摇荡2~4 h，培养液中菌悬液浓度OD600达到0.5左右。 2. 将装有文库的微量离心管在离心机上稍加离心，以便与氯仿分开。 3. 将已包装和滴定的噬菌体水相（不含氯仿）加于铺平板菌中，37℃温育15 mi