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- 2025年07月15日
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50
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南京晶麦生物科技有限公司
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-80
| 货号 | 内容 | 规格 | 滴度 |
| CI0001 | pLenti-SV40 Large T慢病毒滴度液 | 5*200μL | ≥108TU |
SV40是简单的真核细胞病毒，SV40的T抗原片段是最常用的目的片段，将其整合入靶细胞核内并表达，可导致细胞增殖活力的改变并表现出多种与肿瘤相关的转化表型。SV40病毒基因组早期基因编码两种肿瘤抗原(tumor antigen，T抗原)，其分子量分别为94000 (大T抗原)和17000 (小T抗原)。
T抗原有以下的作用: 1、大T抗原为细胞转化的启动所必需; 2、转化细胞表型的维持必需要有大T抗原的连续表达; 3、小T抗原对于细胞的转化不是必需的，但可起加强作用。
本产品为SV40大T抗原过表达慢病毒质粒包装而成的病毒滴度液，含有嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因。
三、产品特点
1、即开即用型产品，省去包装工序；
2、滴度≥108TU/ml，避免反复冻融；
3、根据细胞易感程度，建议病毒稀释比1:10-1:100；
4、使用时请添加转染增强剂polybrene。
四、使用方法（请根据实际实验设计，本方案仅供参考）
进行慢病毒感染实验时可使用完全培养液（培养目的细胞用）稀释。培养液中的血清、双抗或其他营养因子不会影响慢病毒的感染效率。
以 24 孔培养板为例，进行 HEK293 细胞的感染实验操作步骤如下：
1、 细胞的准备
Day-1 在 24 孔培养板接种若干孔，每个孔内接种HEK 293 细胞，铺板时细胞的融合率为50%左右，每孔培养液体积为 300μL，进行病毒感染时细胞的融合率约为70%左右。
2、 感染目的细胞
Day-2 根据实验的实际情况和 MOI 值，用培养液准确稀释慢病毒原液。(可使用无血清培养液稀释病毒原液。) 在目的细胞和对照细胞中分别加入计算好的病毒液， 混匀后放于二氧化碳培养箱（37 ℃、5% CO2）孵育过夜。
注意事项：
1）感染前细胞的状态好坏对最终的感染效果高低影响很大，请务必保证加入病毒前， 细胞处于良好的生长状态。
2）若慢病毒对目的细胞的感染效率较低，可通过提高 MOI 值提高病毒的感染效率，也可在培养液中加入助感染试剂 polybrene来提高病毒的感染效率。
3、更换培养液
Day-3 病毒感染细胞 8-16小时后，更换培养液。
注意事项：换液具体时间需视细胞状态而定。如果慢病毒对细胞有明显毒性作用，影响细胞生长状态，最短可于加病毒 8小时后更换新鲜培养液后继续培养。
4、药物筛选
Day-4 病毒感染细胞48小时后，以适当浓度的Puromycin进行药物筛选（需提前做药物杀伤曲线以确定合理的Puromycin浓度）。
5、继续培养和性状测定
Day-6 Puromycin进行药物筛选2天后，将细胞传代。用普通培养基继续培养细胞，进行相关研究。
五、产品保存
• 收到病毒液后请于-80 ℃或更低环境中保存（若存放于4 ℃，请于一周内用完）。如需多次使用，请分装后保存，避免反复冻融，以免降低病毒滴度。通常情况病毒可于-80 ℃稳定保存约6个月，超过此期限后，请重新检测病毒滴度。
• PPL提供的慢病毒单位标识为TU/ml， 即每毫升慢病毒液中含有具有生物活性的慢病毒颗粒数。如：病毒滴度为>1×108 TU/ml，即每毫升病毒液中至少含有1×108个具有生物活性的病毒颗粒。“TU” 为 “Transducing Units” 的缩写，中文为转导单位，表示可以感染并进入到目标细胞群中的病毒基因组数。
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