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文献和实验*发表【中文论文】请标注:由上海酶研生物科技有限公司提供;
*发表【英文论文】请标注:From Shanghai EK-Bioscience Biotechnology Co., Ltd.
Preparation of N-GST Fusion Protein for Affinity Immobilization of RNA
in a few hours under non-denaturing conditions. However, the performance of affinity purification methods can vary tremendously depending on the RNA immobilization matrix. It was previously shown that RNA immobilization via an optimized λN-GST fusion protein
alterego 查阅了很多文献,结果把自己越搞越糊涂了 因为是做阳离子的复合载体,主要是用PEI进行siRNA的静电吸附,PEI经过修饰之后,氨基有所变化,已经通过化学的比色法进行残余氨基测定,可以确定氨基残基(N)的mol数 但是每个mol的21nt的双链siRNA(19对RNA,2*2个嵌合DNA,很经典的搭配)中磷酸集团(P)应该算成几个mol呢?查阅了许多类似的siRNA文献,都没有正面说这个问题。DNA的东西貌似
今天进行了GST融合蛋白的表达,pGEX-4T-1载体,BL21菌。 步骤:摇菌至A600:0.7,然后加IPTG诱导3小时,温度35度(终浓度:0.3mM),取1ml诱导后菌,离心去培养基,冰冷PBS洗一次,离心,吸净液体,加入1*上样缓冲液50微升和终浓度1mM PMSF,100度煮菌5分钟,离心,取20微升上清跑胶。结果如图。 1.空载体对照有GST的表达 2.所有重组载体同样有GST大小的片断,(箭头 B) 3.箭头A所示的条带在空载体和重组载体处有明显差异。 4.我的目的
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