碧云天生产的T4 RNA Ligase 1,即T4 RNA连接酶1,是一种ATP-依赖的可以催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。T4 RNA Ligase 1对于RNA之间的连接效率最高,DNA与RNA之间的连接效率次之,而DNA之间的连接效率最低,因此也被认为是一种ssRNA ligase。
T4 RNA Ligase 1主要用于RNA和RNA之间的连接,连 接时需要5'磷酸基团和3'羟基的存在。不仅可以进行RNA分子间的连接,也可以进行RNA分子(最短8个碱基)的环化连接。
T4 RNA Ligase 1也可以用于RNA和单核苷酸之间的连接,单核苷酸必须为5'和3'均磷酸化的形式,此时常用于RNA的3'末端标记。
T4 RNA Ligase 1也可以用于DNA和RNA之间的连接。当DNA提供5'磷酸基团,RNA提供3'羟基时,连接效率较高;当DNA提供3'羟基,RNA提供5'磷酸基团时,连接效率非常低。
T4 RNA Ligase也可以用于DNA和DNA之间的连接,但连接效率非常低。主要用于DNA的环化连接,例如5' RACE中的cDNA环化。DNA和DNA之间的连接尽管可以进行,但比较困难。
T4 RNA Ligase 1催化连接反应过程如下。首先,T4 RNA Ligase 1与ATP发生反应,产生中间产物T4 RNA Ligase 1-AMP,并释放焦磷酸;接着,AMP从中间产物T4 RNA Ligase 1-AMP中转移至核酸的5’磷酸末端,形成腺苷酰化核酸中间产物;最后,在T4 RNA Ligase 1的催化下,另一核酸的3’羟基进攻腺苷酰化核酸中间产物的5’磷酸末端,形成3’-5’磷酸二酯键,并释放出AMP。
碧云天生产的T4 RNA Ligase 1催化5’磷酸化3’羟基的单链RNA分子环化连接生成环状RNA的效果参见图1。
图1.碧云天生产的T4 RNA Ligase 1和N公司同类产品(Competitor T4 RNA Ligase 1)催化5’磷酸化3’羟基的单链RNA (pRNA-OH)环化连接生成环状RNA (circular RNA, cRNA)的效果图。使用本产品或国外N公司的T4 RNA Ligase 1,20μl 反应体系底物终浓度为0.5μM,37°C孵育30min进行连接反应,反应完毕后在65°C孵育15min终止反应,立即取样用15%尿素(7M)变性PAGE凝胶在冰水浴中进行电泳,最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的催化效果。
用途:ssRNA的分子间连接和环化;ssRNA与ssDNA的分子间连接和环化;也可以用于ssDNA分之间连接和环化,但效率较低;ssRNA 3′-OH末端用放射性同位素5’-[32P]pCp等的标记;单链Oligo RNA及Oligo DNA的合成;tRNA的特别修饰;在5’-RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)实验中,用于寡核苷酸连接到单链cDNA中;在蛋白质中引入非天然氨基酸等。
来源:大肠杆菌表达的重组蛋白,表达基因的来源为T4嗜菌体,该酶分子量约为44kDa。
活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to convert 1 nanomole of 5´-[32P]rA16 into a phosphatase-resistant form in 30 minutes at 37℃。
纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,不含磷酸酯酶。
酶储存溶液:10mM Tris (pH7.5), 200mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50%(v/v) Glycerol。
10X Reaction Buffer:500 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25℃), 100 mM MgCl2, 20 mM DTT。
失活或抑制:65℃加热15min或煮沸2min可使T4 RNA Ligase 1失活。或加入10%体积的0.5M EDTA pH8.0也可以终止反应。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
R0621S-1 |
T4 RNA Ligase 1 (10U/µl) |
100µl |
R0621S-2 |
10X Reaction Buffer |
300µl |
R0621S-3 |
ATP (10mM) |
200µl |
R0621S-4 |
PEG8000 (50%, RNase free) |
500µl |
— |
说明书 |
1份 |
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
R0621M-1 |
T4 RNA Ligase 1 (10U/µl) |
500µl |
R0621M-2 |
10X Reaction Buffer |
1.5ml |
R0621M-3 |
ATP (10mM) |
1ml |
R0621M-4 |
PEG8000 (50%, RNase free) |
1.5ml×2 |
— |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20℃保存,至少一年有效。