T4 RNA Ligase 1 (ssRNA Ligase)

碧云天生产的T4 RNA Ligase 1，即T4 RNA连接酶1，是一种ATP-依赖的可以催化单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5'-P末端与3'-OH末端之间形成磷酸二酯键的酶。T4 RNA Ligase 1对于RNA之间的连接效率最高，DNA与RNA之间的连接效率次之，而DNA之间的连接效率最低，因此也被认为是一种ssRNA ligase。

T4 RNA Ligase 1主要用于RNA和RNA之间的连接，连 接时需要5'磷酸基团和3'羟基的存在。不仅可以进行RNA分子间的连接，也可以进行RNA分子(最短8个碱基)的环化连接。

T4 RNA Ligase 1也可以用于RNA和单核苷酸之间的连接，单核苷酸必须为5'和3'均磷酸化的形式，此时常用于RNA的3'末端标记。

T4 RNA Ligase 1也可以用于DNA和RNA之间的连接。当DNA提供5'磷酸基团，RNA提供3'羟基时，连接效率较高；当DNA提供3'羟基，RNA提供5'磷酸基团时，连接效率非常低。

T4 RNA Ligase也可以用于DNA和DNA之间的连接，但连接效率非常低。主要用于DNA的环化连接，例如5' RACE中的cDNA环化。DNA和DNA之间的连接尽管可以进行，但比较困难。

T4 RNA Ligase 1催化连接反应过程如下。首先，T4 RNA Ligase 1与ATP发生反应，产生中间产物T4 RNA Ligase 1-AMP，并释放焦磷酸；接着，AMP从中间产物T4 RNA Ligase 1-AMP中转移至核酸的5’磷酸末端，形成腺苷酰化核酸中间产物；最后，在T4 RNA Ligase 1的催化下，另一核酸的3’羟基进攻腺苷酰化核酸中间产物的5’磷酸末端，形成3’-5’磷酸二酯键，并释放出AMP。

碧云天生产的T4 RNA Ligase 1催化5’磷酸化3’羟基的单链RNA分子环化连接生成环状RNA的效果参见图1。

图1.碧云天生产的T4 RNA Ligase 1和N公司同类产品(Competitor T4 RNA Ligase 1)催化5’磷酸化3’羟基的单链RNA (pRNA-OH)环化连接生成环状RNA (circular RNA, cRNA)的效果图。使用本产品或国外N公司的T4 RNA Ligase 1，20μl 反应体系底物终浓度为0.5μM，37°C孵育30min进行连接反应，反应完毕后在65°C孵育15min终止反应，立即取样用15%尿素(7M)变性PAGE凝胶在冰水浴中进行电泳，最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。

用途：ssRNA的分子间连接和环化；ssRNA与ssDNA的分子间连接和环化；也可以用于ssDNA分之间连接和环化，但效率较低；ssRNA 3′-OH末端用放射性同位素5’-[32P]pCp等的标记；单链Oligo RNA及Oligo DNA的合成；tRNA的特别修饰；在5’-RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)实验中，用于寡核苷酸连接到单链cDNA中；在蛋白质中引入非天然氨基酸等。

来源：大肠杆菌表达的重组蛋白，表达基因的来源为T4嗜菌体，该酶分子量约为44kDa。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to convert 1 nanomole of 5´-[32P]rA16 into a phosphatase-resistant form in 30 minutes at 37℃。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。

酶储存溶液：10mM Tris (pH7.5), 200mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50%(v/v) Glycerol。

10X Reaction Buffer：500 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25℃), 100 mM MgCl2, 20 mM DTT。

失活或抑制：65℃加热15min或煮沸2min可使T4 RNA Ligase 1失活。或加入10%体积的0.5M EDTA pH8.0也可以终止反应。

包装清单：

保存条件：

-20℃保存，至少一年有效。