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- 2026年05月27日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Glycogen Phosphorylase a (GPa) Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
糖原磷酸化酶 a（Glycogen phosphorylase a，GPa）试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代谢的关键酶，使糖原分子从非还原端逐个断开 α-1，4-糖苷键移去葡萄糖基，释放 1-磷酸葡萄糖，直至临近糖原分子 α-1，6-糖苷键分支点前 4 个葡萄糖基处。GP 分为有活性的糖原磷酸化酶 a（GPa） 和无活性的糖原磷酸化酶 b（GPb）两种形式。糖原的分解主要在 GPa 的催化下进行。测定原理：
未添加激活剂时，GPa 催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和 1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化 NADP 还原生成 NADPH，在 340nm 下测定 NADPH 上升速率，即可反映 GPa 活性。需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 16 mL×1 瓶， 4℃保存； 试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存； 试剂四：粉剂×1 支， -20℃保存； 样本的前处理：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零；2、 工作液的配制：临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后
-20℃保存，禁止反复冻融。
3、 试剂三的配制：临用前在试剂三管中加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
4、 试剂四的配制：临用前在试剂四管中加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
5、 将工作液、试剂三和试剂四置于 37℃预热 5 分钟；
6、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、10μL 试剂三、10μL 试剂四、10μL 蒸馏水和 160μL 工作液，立即混匀，记录 340nm 处 5min 后的 A1 和 10min 后的吸光值 A2， 计算 ΔA=A2-A1。
相关图片：
GPa 活性计算：
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
- 按样本蛋白浓度计算
GPa（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算
GPa（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=643×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下：
- 按样本蛋白浓度计算
GPa（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算
96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
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文献和实验2.4.1.31.)、纤维糊精磷酸化酶(EC2.4.1.49.)、1，3-β-D-葡聚糖磷酸化酶(EC2.4.1.97.)、嘧啶核苷磷酸化酶(EC2.4.2.2.)、尿苷磷酸化酶(EC2.4.2.3.)、胸腺嘧啶磷酸化酶(EC2.4.2.4.)、鸟苷磷酸化酶(EC2.4.2.15.)等。例如最有代表性的磷酸化酶是糖原磷酸化酶，糖原在体内降解过程中，该酶是催化糖原还原性末端葡萄糖残基的d-1,4-糖苷键断裂，反应，生成1-磷酸葡萄糖和少了一个葡萄糖基的糖原分子(见图)。这类酶多数是作为生化试剂应用
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