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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Alkaline Xylanase Assay Kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
50管/24样

碱性木聚糖酶(Basic Xylanase,BAX)测定试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素
酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,BAX 一般分离自最适生长 pH 为 9 -11 的微生物。
测定原理
BAX 在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,可计算 BAX 活力。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。试剂组成和配制
缓冲液:液体 65mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。(若出现白色絮状或颗粒状沉淀,可 60℃加热溶解后使用)。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。
粗酶提取
- 发酵液:发酵液于 8000g,4℃,离心 15min,取上清,作为待测样品。
- 酶干粉:称约 0.1mg,加 1mL 缓冲液溶解待测。
- 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g
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BAX 计算公式
标准曲线:y = 2.8432x - 0.0293,R2 = 0.9985
- 按液体体积活力计算:
BAX 活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106
- 按蛋白浓度计算:
BAX 活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
- 按鲜重计算:
BAX 活力(nmol/min/g 鲜重)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷W
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V 样=1000µL÷200µL=5;
106:转化因子,即 1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
注意事项
- 吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参
- 试剂盒 2-8℃保存,保质期 3 个月,建议尽快使用。
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