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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
33
- 英文名:
β-Glucosidase (β-GC)/Cellobiase Test Kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
50管/24样

β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase, β-GC)/纤维二糖酶试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
β-GC(EC 3.2.1.21)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化 β-糖苷键水解, 具有多方面生理作用:在纤维素的糖化作用中,β-GC 负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖;β-GC 水解萜烯类香气前驱体,使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味; β-GC 能够水解植物体内野黑樱苷,释放 HCN,从而防止昆虫取食。测定原理:
β-GC 分解对-硝基ben-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基ben酚,后者在 400nm 有最大吸收峰, 通过测定吸光值升高速率来计算 β-GC 活性。自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 10mL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。试剂三:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、培养液、血清(浆)等液体样本:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。2、加样表
| 试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
| 试剂一 | 400 | |
| 蒸馏水 | 400 | |
| 试剂二 | 500 | 500 |
| 样本 | 100 | 100 |
| 上清液 | 500 | 500 |
| 试剂三 | 1000 | 1000 |
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β-GC 活力计算:
标准条件下测定的回归方程为 y =0.00543x -0.0027;x 为标准品浓度(nmol/mL),y 为吸光值。- 按液体体积计算:
β-GC 活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V 反总]÷V 样÷T
=61.39×(ΔA+0.0027)
- 按样本蛋白浓度计算:
β-GC 活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
- 按样本鲜重计算:
β-GC 活力(nmol/min /g 鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W
- 按细菌或细胞密度计算:
β-GC 活力(nmol/min /104 cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T
=0.123×(ΔA +0.0027)
V 反总:反应体系总体积,1mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500 万;T:反应时间,30min。
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文献和实验酶制剂的主要来源。根据各种酶的性质和使用意义常将酶制剂分为六种类型: ①氧化还原酶 ②转移酶 ③水解酶 ④裂解醇 ⑤异构酶⑥合成酶 我国规定允许使用的酶制剂有:木瓜蛋白酶、固定化葡萄糖异构酶制剂、α-淀粉酶制剂、糖化酶制剂、精制果胶酶、β-葡聚糖酶、木聚糖酶、蛋白酶、葡萄糖氧化酶、α—乙酰乳酸脱羧酶、真菌淀粉酶、纤维素酶、纤维二糖酶、转移葡萄糖苷酶、乳糖酶、谷氨酰胺转移酶、磷酸酯酶、脂肪酶、β-淀粉酶、菊酯酶、溶血磷脂酶,共21种。 目录
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体提取液进行纸电泳,染色后在紫外光下观察荧光即可。nptⅡ、cat及庆大霉素转移酶基因,均为抗生素筛选基因,相关的酶可以对底物进行修饰(磷酸化、乙酰化等),从而使这些抗生素失去对植物生长的抑制作用,使得含有这些抗性基因的转化体能在含这些抗生素的筛选培养基上正常生长,也可以用转化体提取液体,外用同位素标记,放射自显影筛选转化体。目前常用的一种报告基因是β-D-葡萄糖苷酶基因,该酶催化底物形成β-D-葡萄糖苷酸,它在植物体中几乎无背景,组织化学检测很稳定,可用分光光谱、荧光等进行检测。荧光酶基因(luc
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