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- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Starch debranching enzyme (DBE) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/24样
淀粉脱分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义
DBE 能够专一性地裂解支链淀粉的α-1，6 糖苷键，产生线性的葡萄糖链，在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。测定原理
采用 3，5-二硝基水杨酸法测定 DBE 催化支链淀粉产生的还原糖，通过测定还原糖含量的变化来计算DBE 活性。需自备的的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水试剂的组成和配制
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1 支，4℃保存；临用前每支加入 6mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂三：液体 12mL×1 瓶，4℃保存； 试剂四：液体 35mL×1 瓶，4℃保存。粗酶液提取
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。2、加样表
| 试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 |
| 95℃水浴 5min 后灭活的样本 | 200 | |
| 粗酶液 | 200 | |
| 试剂一 | 200 | |
| 试剂二 | 200 |
| 试剂三 | 200 | 200 |
| 试剂四 | 600 | 600 |
注意：可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。
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DBE 活力单位的计算
标准条件测定回归方程为 y = 3.8458x - 0.165；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。- 按照蛋白浓度计算
DBE 活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T
- 按样本鲜重计算
DBE 活力(mg /min /g 鲜重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反总]÷(W× V 样÷V 样总)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷W
V 反总：反应体系总体积，0.4mL； V 样：加入样本体积，0.2mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
标准曲线线性范围为 0.1mg/mL-1mg/mL。
ΔA 线性范围为 0.01-2。
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