- ￥2430
- Xkbio
- XK-SJH-A456
- 国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Starch phosphorylase (SP) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
淀粉磷酸化酶（Starch phosphorylase，SP）试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代谢过程唯一的可逆反应酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于质体中，负责延长淀粉的 α-1,4- 葡萄糖链的非还原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于细胞质基质中，催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键磷酸解产生葡萄糖-1-磷酸，负责葡萄糖链的磷酸解，是淀粉代谢过程中的关键酶。
在植物体中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物无机磷浓度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸浓度几乎高了两个数量级，一般认为淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要测定意义。
测定原理：
淀粉磷酸化酶催化淀粉中的 α-1,4-糖苷键与无机磷反应产生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶的作用下产生葡萄糖-6-磷酸，并在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下还原NADP+产生 NADPH，使 340nm 下吸光值增加。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 1.5mL 水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 1.5mL 水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存。
样本的前处理：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清待测。2、细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议
500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
测定步骤：
1、 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm；2、 工作液的配制：临用前按照样本量将试剂一、试剂二、试剂三按照 170μL:10μL:10μL 的比例混合，临用前配制，半小时内使用。
3、 在 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液，立即混匀，记录 340nm 处 1min 时的吸光值 A1 和 6min 时的吸光值A2，计算 ΔA=A2-A1。
相关图片：
SP 活性计算：
- 按样本蛋白浓度计算
SP（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T
=1286×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算
SP（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T
=1286×ΔA÷W
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每万个细胞每分钟产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
SP（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(细胞数量 ×V 样÷V 样总)÷T
=2.572×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；细胞数量，500 万。
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文献和实验，这些疾病表现的异常性是形成了分子间β折叠链-片层联结，或许相当于抑丝酶的环-片层联结[5]。 (5)β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein，Aβ)[6] 老年性痴呆(AD)和Down氏综合征的病理特征是大脑皮层出现老年斑(SP)和神经原纤维缠结(NFT)。β-淀粉样前体蛋白(APP)的水解产物Aβ是构成SP的主要细胞外蛋白质成分，由39～43个氨基酸组成，具有β折迭构型。NFT则是由超磷酸化tau蛋白自聚成不溶性的双螺旋丝(PHF)形成的。tau蛋白是一种含磷糖蛋白，其一级结构中Pro
[45]。另一种改良蛋白品质的方法，是通过野生型基因序列互补其无效等位基因，使转基因小麦恢复了软质表型 [46]。 有关改良淀粉品质的报道并不多。一个报道是 RNA 沉默 Waxy 基因，使转基因小麦籽粒直链淀粉含量降低 [ 47 ] 。在一项更深入的研究中，转改良的玉米 ADP- 葡萄糖腺苷二磷酸焦磷酸化酶大亚基（sh2r6hs) 基因的小麦，进行了田间试验测试。采用不同种植密度和灌溉方式，在 3 个点进行了超过 4 年的转基因田间测试，结果表明，稀植 、灌溉环境比密植、旱作环境条件下更
油为惟一碳源的３株石油降解菌菌株，分别为动胶菌属（Zoogloea sp.）、氮单胞菌属（Azomonas sp.）和假单胞菌属（Pseudomonas sp.）。当然，也可将一种需要降解的物质作为样品中微生物的惟一碳源或氮源进行富集，然后分离筛选。 此外，不少微生物对碳源的利用是不完全专一的，如以油脂为碳源的某些脂肪酶产生菌同样也可以分解淀粉或其他糖类物质获得能源而生长。以石油等碳氢化合物为碳源的油田微生物，也可以利用一些糖类为碳源。具有以上特性的微生物在一般土壤、水、及其他样品中也会存在
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