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- XK-SJH-A435
- 国产
- 2026年05月27日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
ATP-Citrate Lyase (ACL) Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
ATP-柠檬酸裂解酶（ATP-citrate lyase，ACL）试剂盒
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ACL（EC4.1.3.8）是脂肪酸合成中的关键酶，其催化产生的乙酰辅酶 A 可用于脂肪酸合成和碳链延长、黄酮类物质合成、氨基酸合成等。
测定原理：
ACL 在 ATP 和辅酶 A 存在的情况下催化柠檬酸裂解为乙酰辅酶 A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸盐。苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和 NADH 生成苹果酸和 NAD+，在 340nm 测定 NADH 减少速率，计算 ACL 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：液体 2μL×1 支，4℃保存；
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1） 工作液的配置，将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；（注意：可取少量试剂一至试剂二和试剂三中，充分混匀溶解后转移至试剂一瓶中，重复 2-3 遍）；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2） 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液，混匀，立即记录 340nm
处 20s 时的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。
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ACL 活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）ACL 活力计算
单位定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=1608×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 ACL 活力计算
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=1608×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.216×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）ACL 活力计算
单位定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=3216×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 ACL 活力计算
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=3216×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
ACL（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=6.432×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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文献和实验佚名 乙酰CoA羧化酶催化的反应是脂肪酸合成的限速步骤，很多因素都可影响此酶活性，从而使脂肪酸合成速度改变。脂肪酸合成过程中其他酶，如脂肪酸合成酶、柠檬酸裂解酶等亦可被调节。 1.代谢物的调节 在高脂膳食后，或因饥饿导致脂肪动员加强时，细胞内软脂酰CoA增多，可反馈抑制乙酰CoA羧化酶，从而抑制体内脂肪酸合成。而进食糖类，糖
异生转化为丙酮酸，其在体内可以彻底氧化，最终转变为糖。）2、脂肪酸的合成 脂肪酸的合成部位是肝、肾、肺、乳腺、脂肪组织的胞液中，都含有脂肪酸合成酶复合体，均能河床脂肪酸，肝合成能力最强。约比脂肪组织大8～9倍。乙酰CoA首先是在线粒体中，要进行脂肪酸合成必须首先进入胞液。这时就有一个柠檬酸－丙酮酸循环。（乙酰CoA不能自由通过线粒体内膜，主要通过柠檬酸-丙酮酸循环进入胞液：乙酰CoA再线粒体内与草酰乙酸结合，在柠檬酸结合酶的作用下生成柠檬酸，柠檬酸由线粒体内膜载体运入胞液，在由胞液中的柠檬酸裂解酶
酶、转氨酸、己糖激酶、磷酸化酶等。 3.水解酶类(hydrolases)指催化底物发生水解反应的酶类。例如、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶等。 4.裂解酶类(lyases)指催化一个底物分解为两个化合物或两个化合物合成为一个化合物的酶类。例如柠檬酸合成酶、醛缩酶等。 5.异构酶类(isomerases)指催化各种同分异构体之间相互转化的酶类。例如，磷酸丙糖异构酶、消旋酶等。 6.合成酶类(连接酶类，ligases)指催化两分子底物合成为一分子化合物，同时还必须偶
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