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脂肪酶(LPS)测试盒

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  • XK-SJH-A403
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  • 2025年07月11日
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      33

    • 英文名

      Lipase (LPS) test kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100管/96样

    产品细节图片1

    脂肪酶(LPS)活性试剂盒

    微量法 100/96S

    注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

    测定意义:

    LPS 又称甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。LPS 广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。

    测定原理:

    LPS 催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算 LPS 活性。

    自备仪器和用品:

    研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、甲苯 80mL、冰和蒸馏水。

    试剂组成和配制:

    试剂一:液体 65mL×2 瓶,4℃保存。
    试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡 20min。
    试剂三:甲苯 80mL×1 瓶,4℃保存(自备)。试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
    标准品:液体 10 μL×1 瓶,10 µmol/mL 的标准溶液,4℃保存。临用前加入 3.168 mL 甲苯,
    充分溶解。

    粗酶液提取:

    1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
    2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1  的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 12000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
    3. 血清等液体: 直接检测。

    LPS 测定操作:

    1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 710 nm,蒸馏水调零。
    2. 试剂一和试剂二置于 37℃水浴预热 30min。
    3. 在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂
    试剂名称(μL) 空白管 测定管
    蒸馏水 150  
    样本   50
    试剂一 300 300
    试剂二   100
    37℃振荡反应 10 min
    试剂三 800 800
    37℃振荡反应 10 min 后,8000g,25℃,离心 10min,取上清液
    试剂名称(μL) 空白管 测定管 标准管
    上清液 400 400  
    标准品     400
    试剂四 100 100 100
    37℃振荡反应 5 min 后,静置 5min,取 200μL 上层液加入微量石英比色皿/96 孔板,于 710nm
     
    处测定吸光值。

    相关图片:

    产品细节图片2产品细节图片3

    注意:空白管和标准管只需测定一次。

    LPS 活性计算公式:

    1. 组织、细菌或细胞 LPS 活性
    1. 按照蛋白浓度计算
    活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
    LPS (μmol/min/mg prot) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准- A 空白管)]×V 反总÷
    (Cpr×V 样)÷T
    =16×[(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]÷Cpr
    1. 按照样本质量计算
    活性单位定义:37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
    LPS (μmol/min/g  鲜重) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]×V 反总
    ÷(W×V 样÷V 样总)÷T
    =16×[(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]÷W
    1. 按照细菌或者细胞数量计算
    活性单位定义:37℃中每 104 个细胞每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
    LPS (μmol /min/104cell) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]×V 反总
    ÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T
    =16×[(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]÷细胞数量
    1. 血清等液体 LPS 活性
    活性单位定义:37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。LPS (μmol /min/mL) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]×V 反总÷V 样÷T
    =16×[(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管- A 空白管)]
    C 标准品:10 µmol/mL;V 反总:反应总体积,0.8mL;V 样:反应中加入样本体积,0.05mL; V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL,需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;W:样本质量,g;T:催化反应时间,10 min。

    产品细节图片4

     

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