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- Xkbio
- XK-SJH-A392
- 国产
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
69
- 英文名：
3-phosphoglycerate kinase (PGK) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）试剂盒
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化 1，3-二磷酸甘油酸转变为 3-磷酸甘油酸，产生 1 分子 ATP，具有影响 DNA 复制和修补及刺激病毒 RNA 合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
测定原理
3-磷酸甘油酸激酶催化 3-磷酸甘油酸和 ATP 产生 1,3-二磷酸甘油酸和 ADP，1,3-二磷酸甘油酸在 3-磷酸甘油醛脱氢酶和 NADH 作用下产生 3-磷酸甘油醛、NAD 和磷酸，340nm 处的吸光度变化反映了 3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。试剂组成和配制
提取液：液体 100mL×2 瓶，4℃保存。试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后
-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 支，-20℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后
-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 支，-20℃避光保存。临用前加 1 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 4 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
酶液提取
①总 PGK 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，500g 离心 5min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体 PGK 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液），冰浴匀浆后于 4℃，500g 离心 5min，弃沉淀，取上清在 4℃，8000g 离心 10min，取上清用于测定胞浆 PGK 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃， 500g 离心 5min，取上清测定叶绿体中 PGK 酶活性。
建议测定总PGK 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 PGK， 则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作
- 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
- 取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 100μL 试剂一，20μL 试剂二，10μL 试剂三，10μL 试剂四，40μL 试剂五，20μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s 的吸光值 A2，△A=A1-A2
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计算公式
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- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
- 按照样本蛋白浓度计算
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
- 按照样本质量计算
PGK（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
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- 用 96 孔板测定的计算公式如下
- 按照样本蛋白浓度计算
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
- 按照样本质量计算
PGK（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=643.08×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
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文献和实验磷酸甘油酸激酶 phosphoglycerate kinase
为糖酵解系统的酶。EC2． 7． 2． 3。由 1 ， 3- 二磷酸甘油酸和 ADP产生 3- 磷酸甘油酸和 ATP。 Δ G°′ = - 4.50kcal。在糖酵解系统中是第一个产生 ATP的部位。
书太大了，上传不了，需要的话我可以发到邮箱或者各位在网上载，assaydesigns公司网页就有。 licanming 怎么无人回啊？只好自己顶一下！ zhidanguilai 检测PKC活性可以用加拿大Immunechem公司的非放射性蛋白激酶C活性分析试剂盒，安全、快速、稳定，可用于筛选蛋白激酶C抑制剂或激活剂、定性定量分析纯化或部分纯化的PKC激酶活性。 测试盒原理： 基于ELISA的基本
分析试剂盒安全、快速、稳定，可用于筛选蛋白激酶C抑制剂或激活剂、定性定量分析纯化或部分纯化的PKC激酶活性。 测试盒原理： 基于ELISA的基本原理。PKC底物被包被在酶标板上，在ATP存在的前提下，PKC激酶将底物磷酸化，洗掉游离的PKC激酶和其他成分。再加入特异性磷酸化抗体（只识别磷酸化底物，而与非磷酸化底物无交叉反应。）检测残留在酶标板上的磷酸化底物。通过酶标二抗放大信号，读出OD值（蛋白激酶活性与OD值的对数成正比）。与对照组相比，得出处理组的蛋白激酶活性
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