亚硝酸还原酶（NiR）生化试剂盒

亚硝酸还原酶（Nitrite reductase，NiR）试剂盒

分光光度法 50 管/24 样注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义
硝酸还原酶（NiR）是一类能催化亚硝酸盐还原的酶，广泛存在于微生物及植物体内，是自   然界氮循环过程中的关键酶，可以将亚硝酸盐降解为 NO 或 NH3，从而减少环境中亚硝态氮的积累，降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。

测定原理

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亚硝酸还原酶可将 NO —还原为 NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO —减少，即 540nm 处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品

天平、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿。

试剂的组成和配制

提取液：液体 80mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 12mL 蒸馏水溶解。
试剂三：液体 12mL×1 瓶，4℃保存。（如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解）
试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。（如出现沉淀可以 70-80℃加热溶解） 试剂五：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。
工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。

酶液提取

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议

500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。

相关图片：

测定操作表

	空白管	对照管	测定管
样本（μL）		100	100
蒸馏水（μL）	100	200
试剂一（μL）	200		200
试剂二（μL）	200	200	200
混匀后，25℃反应 1h
试剂三（μL）	200	200	200
充分震荡 30S
上清液（μL）	350	350	350
工作液（μL）	700	700	700
充分混匀，蒸馏水调零，立即测定 540nm 处吸光值，分别记为 A 空白管、 A 对照管、A 测定管。空白管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。

计算公式
标准曲线：y = 1.3594x + 0.0072，R2 = 0.9997；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值（A