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- XK-SJH-A134
- 国产
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Cytoplasmic isocitrate dehydrogenase (ICDHc) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
胞浆异柠檬酸脱氢酶（ICDHc）试剂盒说明书
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ICDHc（EC 1.1.1.42）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸，同时还原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种NADPH 重要来源，在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。
测定原理：
利用 ICDHc 催化 NADP+还原成NADPH 反应，在 340 nm 下测定 NADPH 浓度的增加。所需的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 19 mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；
样本的前处理：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。2、 将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解；在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种） 水浴 10min 以上；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 样本和190μL 试剂一，混匀后立即记录340nm
处 20s 后吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
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注意事项：
1、 若 A2-A1 大于 0.5，需将酶液用提取液稀释，使 A2-A1 小于 0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。2、 若 A2-A1 小于 0.005，可延长反应时间到 5min 或 10min。
ICDHc 活力单位的计算：
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=1608×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 ICDHc 活力的计算:
- 按样本蛋白浓度计算：
ICDHc（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算：
ICDHc（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=1608×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算：
ICDHc（nmol/min/104）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=3.216×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=3216×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 ICDHc 活力的计算：
- 按样本蛋白浓度计算：
ICDHc（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算：
ICDHc（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=3216×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算：
ICDHc（nmol/min/104）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=6.432×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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文献和实验异柠檬酸脱氢酶 isocitrate dehydrogenase
异柠檬酸脱氢酶 isocitrate dehydrogenase 有两种类型的酶：要求以 NAD为辅酶的酶（ EC1． 1． 1． 41）和要 NADP的酶（ EC1． 1． 1． 42），两者催化同一反应。 异柠檬酸 NAD（ P） α -酮戊二酸 CO2 NAP（ P） H H4 在三羧酸循环中正常起作用的是要求 NAD为辅酶的酶，此酶是为 ADP激活的变构酶。
异柠檬酸 isocitric acid柠檬酸的异构体，虽然量少，但广泛存在于生物界。在落地生根属（ Bryophyllum）等多汁植物的叶、或悬钩子类中特别多，生物能够利用的是 D型。是三羧酸循环中的一个成分。柠檬酸在鸟头酸酶的作用下可逆地生成异柠檬酸和顺鸟头酸。在异柠檬酸脱氢酶（ EC1． 1． 1． 41）的作用下变成 a-酮戊二酸，在异柠檬酸裂合酶（ isocitrate lyase， EC4． 1． 3． 1）的作用下变成琥珀酸与乙醛
它的活性，AMP可对抗ATP的抑制而起激活作用。 (2)异柠檬酸形成 柠檬酸的叔醇基不易氧化，转变成异柠檬酸而使叔醇变成仲醇，就易于氧化，此反应由顺乌头酸酶催化，为一可逆反应。 (3)第一次氧化脱酸 在异柠檬酸脱氢酶作用下，异柠檬酸的仲醇氧化成羰基，生成草酰琥珀酸(oxalosuccinate)的中间产物，后者在同一酶表面，快速脱羧生成α-酮戊二酸(αketoglutarate)、NADH和CO2，此反应为β-氧化脱羧，此酶需要Mn2+作为激活
