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HSC-T6细胞
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HSC-T6
1x10^6/瓶
上海酶研
无
大鼠肝星状细胞
大鼠
贴壁/悬浮
否
顺丰快递
5年
生长良好
HSC-T6细胞系、HSC-T6细胞株、HSC-T6细胞、HSC-T6大鼠肝星状细胞Culture Insert方法1. 准备细胞,培养液,culture Insert。2. 如图,将细胞接种于Dish中间的Insert,细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500 μm宽度的划痕。3. 每隔4-6小时拍照记录。4. 根据收集图片数据分析实验结果。总结:相比较于传统的划痕实验,Ibidi的设计更科学、重现性更好:实验目的掌握细胞计数的方法。了解区分细胞存活状态的方法。实验用品0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。实验原理在细胞培养工作中,常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活,确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度,如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别,冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后,常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色,进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高,可使染料进入细胞内而使细胞着色(蓝色)。细胞计数一般用血细胞计数板,按白细胞计数方法进行计数,便于确定细胞的生活状况。实验内容与方法(一)制备动物细胞悬液将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。(二)细胞计数1. 计数板处理用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后,用绸布擦净,另擦净盖玻片一张,把盖片覆在计数板上面。2. 染色用滴管吸取0.4%台盼蓝染液,按1∶1比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入,使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡,否则要重做。稍候片刻,将计数板放在低倍镜下(10×10倍)观察计数。3. 计数方法按图计算计数板的四角大方格(每个大方格又分16个小方格)内的细胞数。计数时,只计数完整的细胞,若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中,如果有细胞位于线上,一般计下线细胞不计上线细胞,计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±5%(图7-1)。镜下观察,凡折光性强而不着色者为活细胞,染上蓝色者为死细胞。4. 计数的换算计完数后,需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计数板中每一方格的面积为0.01 cm2,高为0.01 cm,这样它的体积为0.0001 cm3,即0.1 mm3。由于1 ml=1000 mm3,所以每一大方格内细胞数×10 000=细胞数/ml,故可按下式计算:细胞悬液细胞数/ml=4个大格细胞总数/4×10 000如计数前已稀释,可再乘稀释倍数。计数细胞后,计算细胞悬液浓度并求出存活与死亡细胞数的比例。注意事项:向计数板中滴细胞悬液时要干净利落,加量要适当,过多易使盖片漂移,或淹过盖片则失败,需重做,过少易出现气泡;不理想时,应重做;镜下计数时,若方格中细胞分布明显不均,说明细胞悬液混合不均匀,需重新将细胞悬液进行混合,再重新计数。
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375 人阅读发布时间:2015-04-01 15:18
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